일반생물학실험 | Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석

 

 

 

TIP

 

 

Bradford법을 이용하여 단백질 정량을 하고 이를 바탕으로 Standard curve를 그린다.

 

 

 

단백질 정량을 하는 이유

단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양,또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생화학 실험에 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우 다른 분야와 달리 실험 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘 못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에, 단백질을 정확하게 정량하는 것은 매우 중요하다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 주어진 BSA 2㎍/㎖ 용액 0.8 ㎖ , 증류수 3.2 ㎖ 를 마이크로 피펫으로 취하여 혼합하여 희석한다.(BSA 농도는 400㎍/㎖이 된다.)

 

2)  400㎍/㎖로 희석된 BSA 용액 1 ㎖ , 증류수 1 ㎖ 를 마이크로 피펫으로 취하여 혼합하여 희석한다.(BSA 농도는 200㎍/㎖이 된다.)

 

3)  400㎍/㎖로 희석된 BSA 용액 0.5 ㎖ , 증류수 2 ㎖ 를 마이크로 피펫으로 취하여 혼합하여 희석한다.(BSA 농도는 80㎍/㎖이 된다.)

 

4)  200㎍/㎖로 희석된 BSA 용액 1 ㎖ , 증류수 3 ㎖ 를 마이크로 피펫으로 취하여 혼합하여 희석한다. (BSA 농도는 50㎍/㎖이 된다.)

 

5)  400㎍/㎖, 200㎍/㎖, 80㎍/㎖, 50㎍/㎖로 희석된 BSA용액 100㎕(100P)를 취하고 각각 Bradford 염색약(Coomassie brilliant blue 염료)1 ㎖와 섞어준 뒤 5분간 방치한다.

 

6)  5)에서 만든 BSA 용액과 Bradford 염색약의 혼합물들의 흡광도를 Spectrophotometer를 이용하여 측정한다. (이 때 595㎚ 파장으로)

 

7)  Spectrophotometer를 사용해 얻은 값들을 토대로 Standard curve를 작성하고, 이를 이용해 미지시료의 농도를 유추한다.

 

 

 

[일반생물학실험]Bradford법을 이용한 단백질의 정량 분석 레포트