일반생물학실험 | Measurement of Microbiological Activity and Growth

 

 

 

TIP

 

 

유기물이 산화하면서 Electron을 발생한다. 여기서 Electon → [H⁺]를 미생물이 받아들이는데 실험을 통해서 -INT를 가함으로써 이 INT가 [H⁺]를 intercept하여 색을 변화시킨다. 생물학적 처리방법은 폐수내에 존재하는 유기물중에서 생물에 의해서 분해 가능한(Biodegradable) 유기물을 미생물을 사용하여 소기시키는 방법으로 이때 이용되는 미생물은 원생동물, 조류, Bacteria가 있다.

 

 

 

효소(Enzyme)의 역할

효소란 소량으로도 화학반응속도를 촉진시키는 것으로 생체내의 고분자 화합물로 된 생체촉매(Biocatalyst)이다.

 

1. 효소의 구조

생체내에 존재하는 효소는 단순단백질(Simple Protein)이나 단백질과 단백질이 아닌 물질이 결합된 복합단백질(Compound Protein)로 구성되어 있다. 단순단백질에 속하는 효소는 아밀라아제(amylase)를 비롯한 여러 가지의 가수분해효소가 있고, 기타 많은 효소들은 복합단백질에 속한다. 단순단백질로 된 효소나 복합단백질로된 효소이거나 모두 분자상에 화학반응을 일으키게 하는 활성부분이 존재한다.

 

즉 단순단백질의 경우에는 분자내의 특정한 아미노한 부분이 활성부위를 이루고 있고, 복합단백질로된 효소의 경우에는 효소의 활성에 필요한 성분이 단백질과 강한 결합을 이루고 있으며, 그 성분을 보결분자단(prosthethic group)이라고 부르고, 투석(Dialysis)등에 의하여 쉽게 분리될 때에는 조효소(Coenyme)이라 한다. 이때 단백질부분을 조효소에 대하여 주효소(apoenzyme)라 부르고 조효소와 주효소에 결합되어 효소작용 나타낼 때 이를 전효소라 한다.

 

생체내에 존재하는 복합단백질로 구성되어 있는 효소의 보결분자단이나 조효소를 이루고 있는 물질로는 티아민(Thiamine), 피리독신(Pyridoxin), 니아신(Niacin), 리보플라빈(Riboflavin), 판토텐산(Panthothenic), 비오틴(Biotin), 엽산등의 비타민류와 철-포르피린 및 Cu, Fe, Mn등과 같은 중금속이온과 미량원소의 Mo, Zn, B등이 있다.

 

 

실험 방법

1. INT Treatment

1) pH를 8.6으로 조절한 시료 5㎖을 vial에 취한다.(묽은 H₂SO₄ or NaOH)

 

2) INT용액(0.2%) 0.5㎖을 가한다.(INT는 햇빛에 약하므로 알루미늄으로 봉한다.)

 

3) 냉암소에서 1시간동안 흔들면서 배양한다.

 

4) 37% 포르말린(formalin)용액 0.5㎖를 가하여 혼합한다.

 

2. 추출(Extraction)

1) 위 4)번의 시료을 5㎖취하여 1500rpm으로 10분동안 원심분리한다.

 

2) 원심분리 후 상등액은 버리고 Tetrachloroethyene + Aceton(4+6) 혼합액 10㎖를 가한다.

 

3) 어두운 곳에서 흔들면서 30분간 추출한다.

 

4) 1500rpm으로 10분간 원심분리한다.

 

5) 추출된 용액(붉은색의 용액)을 일정량 취하여 490㎚에서 흡광도를 측정한다.

 

6) blank test는 Tetrachloroethylene + Aceton(4+6) 혼합액의 흡광도를 측정한다.

 

 

 

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