일반생물학실험 | 단백질 정량

 

 

 

우리 몸을 구성하는 중요한 물질 중 하나인 단백질. 단백질은 효소로도 작용하기도 하고 우리 몸의 조직을 구성하기도 합니다. 다양한 용도에 쓰인 단백질이 세포나 샘플에 얼마나 포함되어 있는지 그 농도와 양을 구하기 위해서 단백질 정량이라는 실험을 합니다. 단백질 정량은 대부분의 생명과학 실험의 기본이며 대학원생들이 굉장히 많이 하는 실험이라고 알려져 있습니다.

 

이번 실험에서는 주어진 수용액에 녹아있는 단백질 양을 정량하는 데에 Bradford assay 방법을 사용하였으며 여러 농도의 용액을 사용하여서 흡광도와 농도간의 관계나 패턴이 있는지에 대해서 알아보았습니다. Bradford assay 방법에 사용하는 브래드포드 지시약은 평상시에는 녹갈색을 띄고 있다가 단백질과 결합하면 청색을 띄는 특징이 있고 색이 얼마나 변했는지에 따라서 수용액 내의 단백질 양을 판단합니다.

 

색이 얼마나 변했는지 육안으로도 판단할 수 있지만 더욱 더 정확한 판단을 위해서 흡광도를 사용합니다. Beer-Lambert Law 에 의해서 흡광도는 소광계수, 길이, 농도에 정비례하는데 만약 소광계수와 길이를 고정시켜준다면 흡광도는 농도에 정비례한다는 것을 이용하여 이번 실험을 진행했습니다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 마이크로튜브 4개에 각각 1～4까지 번호를 적은 후, 2㎎/㎖ BSA 용액을 각 마이크로튜브에 0㎕, 2㎕, 4㎕, 6㎕만큼 넣어준다.

 

2) 그 다음 총 부피를 20㎕로 맞춰주기 위해 증류수를 각 마이크로튜브에 20㎕, 18㎕, 16㎕, 14㎕만큼 넣어준다.

 

3) 그리고 나머지 마이크로튜브 1개에 미지시료를 2㎕, 증류수를 18㎕만큼 넣어준다.

 

4) 각 마이크로튜브에 준비된 1x 지시약을 980㎕씩 넣고 섞은 후 약 5분간 기다린다.

 

5) BSA를 넣지 않은 1번 용액을 큐벳에 옮겨 담는다. 흡광광도계의 전원을 킨 후 1번 용액을 담은 큐벳을 측정구에 꽂은 후, 영점 조절 버튼을 누름으로써 영점을 설정한다.

 

6) 그 다음에 2, 3, 4번 용액과 미지시료 용액을 각각 큐벳에 옮겨 담은 후 측정구에 꽂고 측정 버튼을 눌러서 흡광도를 측정한다.

 

7) 그 후 실험에서 얻은 흡광도 값들을 갖고 선형 회귀를 이용함으로써 넣어준 2㎎/㎖ BSA 용액의 부피와 흡광도 사이의 관계식을 구하고, 이 식을 통해 미지시료의 농도를 계산한다.

 

 

 

[일반생물학실험]단백질 정량 레포트