일반생물학실험 | Plasmid DNA purification

 

 

 

E.Coli

1. BL21은 일반적인 E.coli host와 달리 protease의 활성을 죽여놓아 단백질의 발현에 많이 사용하고 있습니다.

 

2. 전 생물을 통틀어서 가장 초월적인 번식속도를 자랑한다.

 

3. 생존능력이 뛰어난데 많은 종류의 유기물을 에너지원으로 사용 가능하고 산소나 온도의 변화에도 강해 다양한 환경에서 서식 가능.

 

4. 실험실에서 주로 쓰는 K-12 MG1655계열의 대장균의 경우 약 20분에 1번 세포분열을 하며 이 특성과 함께 실험적으로 상당히 쉽게 배양되는 편이라서 생물학 실험에서 잘 쓰인다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) plasmid DNA를 가지고 있는 E.Coli의 단일 콜로니를 접종한 후 Shaking incubator에서 배양한다.

 

2) Glur-1-CT(5㎖)를 에핀도르프 튜브(1.5㎖)안에 가득차게 넣는다.

 

3) 센트리퓨즈(13,000rpm)에 5분간 돌린다.

 

4) Pellet만 남기고 supernatant를 버렸다.

 

5) S1 buffer(250 ㎕)을 넣고, 뿌옇게 변할 때까지 vortexing을 한다.

 

6) S2 buffer(250 ㎕)을 넣고 inverting(역전)을 4번 천천히 한다.

 

7) S3 buffer(350 ㎕)을 넣는다.

 

8) 센트리 퓨즈(13,000rpm.)에 넣고10분간 돌린다.

 

9) Supernatant SV칼럼으로 상층액만 옮긴다.

 

10) P.W(300 ㎕)랑 추출물을 센트리퓨즈(13,000 rpm)에 넣고 30초 돌리고 Supernatant를 버린다.

 

11) D.W(30 ㎕)를 넣고, 30초간 센트리퓨즈(13,000 rpm)에 돌린다.

 

12) Supernatant를 버린 후 1분간 기다린다.

 

13) 1분간 센트리퓨즈(13,000 rpm)에 넣고 돌린다.

 

14) 1분 후 새 튜브로 갈아준다.

 

15) DNA농도 검사(1 ㎕)

 

 

 

[일반생물학실험]Plasmid DNA purification 레포트