생화학실험 | 다당류의 구조 분석 및 아이오딘 산화(Periodate Oxidation) 반응

 

 

 

TIP

 

 

아이오딘 산화(Periodate Oxidation)반응을 이용하여 단당류와 이당류의 농도를 계산하고 다당류(Glycogen)의 1차적 구조를 알기 위한 것이다.

 

 

 

아이오딘 산화(Periodate Oxidation) 반응

반응시료가 아래와 같을 때 periodate(NaIO₄)와 반응하면 산화와 탄소-탄소 결합의 분해를 동시에 가져온다. 두 개의 하이드록실기가 이웃하거나 한 개의 하이드록실기가 알데히드 또는 케톤과 이웃하고 있을 때, 각각의 알데히드와 케톤과 동적평형을 이루는 당의 헤미아세탈과 헤미케탈은 알데히드와 케톤처럼 작용한다.

 

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 실험 진행 일주일 전

① 100mM Glycerol 10㎖를 정확히 재서 10㎖의 0.4M NaIO₄ 용액을 넣고 Parafilm으로 sealing하여 잘 섞은 뒤 호일로 싸서 암실에 둔다.

② Glycogen은 1%용액 20㎖를 만들어 5.0㎖ 의 0.4M NaIO₄ 와 잘 섞어둔다.(이 때 각 과정에서 Blank(시료를 넣지않은 대조군)을 만들어둔다.)

 

1(blank)	2(glycerol)	3(blank)	4(glycogen)
DW 10㎖	glycerol 10㎖	DW 20㎖	glycogen 20㎖
NaIO4 10㎖	NaIO4 10㎖	NaIO4 5㎖	NaIO4 5㎖

 

 

2) 일주일 전에 준비해둔 Tube 1～4에 1㎖의 ethylene glycol을 넣어준다.

3) 4개의 튜브에 페놀프탈레인 (0.1M 용액 5㎕)를 넣고 잘 흔든다.

4) RT(Room Temperature, 상온)에서 10분 Incubation한다.

5) 50mM NaOH 를 천천히 넣고 흔들어주면서 적정한다.(무색→옅은 보라색)

 

 

 

[생화학실험]다당류의 구조 분석 및 아이오딘 산화(Periodate Oxidation) 반응 레포트