반응형 생명화공실험 | 완충용액 TIP 완충용액을 제조하는 방법을 익히고 완충용액의 특성을 파악하는 것이다. 실험 요약 pH 측정기, NaOH 용액, HCl 용액, Sodium acetate trihydrate, Glycine 등을 이용하여 완충용액을 제조하는 방법을 익히고 완충용액의 특성을 파악해보았다. 각각의 완충용액을 제조하여 Sodium acetate trihydrate 완충용액에는 NaOH를, Glycine 완충용액에는 HCl을 가해주어 완충용액이 더 이상 완충작용을 하지 못하는 부분이라 생각할 수 있는 용액의 pH가 급변하는 지점을 관찰해본 결과, 완충용액의 농도와 완충 값 사이에 비례관계가 성립함을 알 수 있었다. 완충용액 (Buffer) 제조방법 완충용액을 제조하는 방법은 여러 종류가 있으나 가장 간단하고 안전한 방법은 .. Biology/생명 과학 | 공학 2023. 3. 6. 생명과학실험 | 동물-식물세포의 관찰 TIP 진핵생물의 구조 및 기능의 기본단위인 동물(구강상피)과 식물세포(양파표피)를 관찰하고 비교하며, 광학현미경 사용법을 익힌다. 동물 및 식물세포의 공통점과 차이점 1. 공통점 동물 및 식물세포에는 세포막, 핵, 소포체, 골지체, 미토콘드리아 등의 다양한 세포소기관이 공통적으로 들어있다. 2. 차이점 동물세포는 운동을 담당하는 중심립과 엽록체가 있는 반면, 식물세포는 중심립과 엽록체가 없다. 또한, 동물세포는 원형질막이 있어 세포 내외를 구별할 수 있지만 식물세포는 원형질막 밖에 세포벽이 있다. 세포 내외로 물질 수송을 돕는 부수적 역할의 액포만 간혹 존재하지만 식물세포는 노폐물을 저장하는 액포가 세포의 약 30%의 부피를 차지할 정도로 발달되어 있다. 실험 방법 1. 양파 표피세포 관찰 1) 슬라이.. Biology/생명 과학 | 공학 2023. 2. 27. 생명공학실험 | 세포 배양(cell culture) TIP 1. 세포배양을 통하여 세포의 성장 주기와 세포배양법을 익힌다. 2. Hemocytometer를 이용하여 세포 수를 계산할 수 있다. 세포 배양 1. 다세포 생물에서 분리한 세포를 특수한 용기 내에서 성장 및 보존 세포의 세대를 포존시키는 것을 뜻한다. 특수한 용기, 온도, 습도, 영앙소 등의 배양 조건이 필요하다. 2. 계대 배양 : 세포증식을 위해 새로운 배양접시에 옮겨 세포의 대를 계속 이어서 배양하는 방법으로, 제한된 배양접시 내에서 세포가 증식을 멈추게 되므로 이것을 막고 세포가 증식할 수 있게끔 새로운 공간을 제공한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) HBSS를 첨가한다. 2) Trypsin-EDTA 2㎖ 첨가후 37℃ 인큐베이터에 2분간 보관한다. 3) DMEM(+) 10㎖ 첨가후, .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 12. 29. 생명과학실험 | 단백질 분리정제 및 기능분석 TIP 1. DEAE Sepharoge anion exchange chromatography를 통한 단백질 분리 2. Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다. AP의 정제과정 1. AP가 outer membrane과 inner membrane 사이에 존재하는 경우, osmotic shock을 주어 outer membrane만 깨지게 한다. 2. Spheroplast 상태일때 centrifuge를 하면 supernatant와 pelet으로 분리된다. (이때, AP는 sup. 에 존재한다) 3. AP의 크기를 이용하여 dialysis를 하여 size 별로 분리한다. Bovine의 경우는 homodimer상태로 kDa=160-180 이다. 4. Bov.. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 11. 2. 생명공학실험 | Plasmid DNA preparation TIP Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA pBluescript SKⅡ(+)를 isolation 한다. Plasmid DNA를 정제하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용되는데 공통적으로 다음의 세 과정- 미생물의 배양과 플라스미드 증폭 ; 미생물 수거와 cell lysis ; plasmid DNA 정제-을 거친다. DNA를 분리하기 위해서는 일단 DNA가 세포 밖으로 유출되도록 세포벽 및 세포막을 분해 시켜야 하고, 이때 DNA 가수분해 효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다. 세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해 .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 9. 24. 생명과학실험 | Gram Staining TIP 1. 그람 염색의 화학적, 이론적 기초를 파악하고 그람 양성과 음성의 박테리아를 구분할 수 있다. 2. 그람염색을 통해 미생물을 그람양성과 그람음성으로 분류한다. 그람염색을 통해 미생물을 분류할 수 있다. 그람염색법의 원리 그람 염색을 하기 위해선 관찰하고 싶은 세포에 염색액을 묻힌 후 요오드용액처리를 한다. 그 후 에탄올로 세포를 씻게 되면 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색(염색액의 색)으로 보이게 된다. 자주색으로 균이 보이게 되기 때문에 그람염색법을 이용하여 균을 관찰할 수 있었다. 하지만 에탄올 처리 과정에서 특정균의 경우에는 탈색되는 경우가 있다. 그래서 그람염색을 할 때 에탄올 처리 과정에서 탈색 되지 않는 세균을 그람 양성균이라 하고 탈색되는 균을 그람 음성균 이라고 한다... Biology/생명 과학 | 공학 2022. 7. 30. 생명과학실험 | 어류의 일반구조 척삭동물문 척추동물아문에 속하는 어류는 턱이 없는 무악어와 턱을 가진 연골어 및 경골어로 구분된다. 무악어에는 먹장어와 칠성장어가 포함되며 상어, 홍어 및 가오리 등이 연골어에 속하고 피라미, 붕어 등은 경골어에 속한다. 무악어는 비늘이 없는 점액성의 피부를 가지지만 연골어와 경골어 는 일반적으로 진피성의 비늘이 몸통과 꼬리지느러미 앞부분에 분포한다. 연골어는 종에 따라 경린, 원린 또는 즐린으로 싸여 있다. 어류의 몸은 방 추형으로 머리, 몸통 및 꼬리로 구분되며 쌍을 이루는 가슴지느러미와 배 지느러미 그리고 쌍을 이루지 않는 등지느러미, 뒷지느러미 및 꼬리지느러 미를 부속지로 가지고 있다. 아가미를 통하여 호흡하며 어떤 종들은 부레 를 가진다. 특히 경골어의 아가미는 좌우 아가미덮개 속에 각각 4장씩.. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 7. 9. 생명과학실험 | 원생생물의 관찰 TIP 채집 수에 살고 있는 원생생물을 현미경을 이용하여 생김새를 관찰할 수 있다. 또한 물이 있는 환경에서 세균의 운동성을 이해한다. 원생생물이란 보통 1개의 핵을 가진 단세포생물로서 가장 원시적인 생물을 말한다. 하지만 최근에는 배를 형성하고, 조직분화가 나타나지 않고 파동모가 있는 경우에는 미소관이9+2구조로 배열되는 진핵생물을 원생생물이라고 지칭한다. 따라서 다세포생물이어도 원생생물일 수 있다. 그 대표적인 예로는 짚신벌레, 볼복스, 아메바, 유글레나, 규조류 등이 있다. 짚신벌레는 몸 전체에 균일하게 섬모가 나있고, 섬모운동을 한다. 입의 뒤쪽부터 가로로 분열하여 증식하고 성숙하면 접합에 의한 유성생식을 한다. 암수 구분은 없지만 접합을 할 수 있는 상대가 유전적으로 정해져 있다. 세균류를 먹고.. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 4. 5. 생명과학실험 | 식물 플랑크톤 관찰 Algae(조류‧식물 플랑크톤) 조류는 수중생활을 하며 광합성을 할 수 있는 원생생물의 총칭이다. 일반적으로 조류는 해수나 담수에서 생육하는 것을 가리키나 기수.습지.빙설.온천 속 등에서 생육하는 것도 포함된다. 이름에서 식물 플랑크톤과 조류를 분류하기는 하지만 수중생활을 하며 독립영양생물로서 거의 같다고 볼 수 있다. 대부분의 조류가 광합성 색소를 가지고 독립 영양 생활을 하여, 과거에는 식물에 속하기도 하였는데 줄기, 뿌리, 잎이 구별되지 않고 포자를 통해 번식하여 꽃이나 열매를 맺지 않는 특징을 가지며 포자 혹은 이분법으로 번식하는 생물이다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) Tube에 담겨 있는 sample을 슬라이드 글라스 위에 1방울 떨어뜨린다. ∴ sample을 너무 많이 떨어뜨리면 조류가 심.. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 3. 30. 생명과학실험 | 수서곤충 관찰 수서 곤충 수서곤충은 물에 사는 곤충으로 일생을 민물에서 산다. 평생을 물속에서 생활하는 종도 있지만 대부분은 알이나 유충, 번데기 및 일생의 일부만을 물속에 서식하기도 한다. 평생을 물에서 사는 곤충은 진수서곤충이라고 한다. 딱정벌레목, 노린재목은 알이나 유충시기부터 물속에서 일생을 보내고 일부만을 물속에서 생활하는 곤충에는 잠자리, 하루살이, 날도래, 뱀잠자리, 강도래, 반딧불이 등이 있다. 수서곤충은 물속에서 여러 가지 방식으로 호흡한다. 대기 중 산소를 직접 이용하는 방법과 물속에 녹아있는 산소를 이용하는 방법이 있다. 대표적으로 물방개는 물 표면에서 공기방울을 뒤에 가져다 달고 다니며 호흡한다. 대기 중의 산소를 이용하는 곤충은 산소가 필요할 때마다 표면으로 올라와 호흡 후에 다시 내려가 생활한.. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 3. 29. 생명과학실험 | pGal을 활용한 대장균 형질전환 TIP Plasmid DNA에 의한 박테리아 형질전환을 할 수 있으며 파란색의 박테리아 콜로니의 존재로 Lac+형질을 설명하는 것이다. 박테리아의 형질 전환 박테리아의 형질전환은 박테리아 세포 내로 플라스미드 DNA를 투입해주는 작업을 의미한다. 세포가 세포막을 통해 외부 DNA를 직접 받아들이고, 형질 도입 및 접합을 통해 박테리아의 형질 전환이 일어난다. 실험 방법 1. 실험 과정 형질 전환 실험 전, LB Agar 플레이트 준비 및 대장균 소스 플레이트 준비 과정이 필요하다. 각각의 과정은 다음과 같다. 1) LB Agar 플레이트 준비 ① 고체 ReadyPour LB Agar를 누르고 흔들어 작게 부순다. ② 뚜껑을 일부 열어 가열되는 동안 수증기가 빠지지 않도록 한다. ③ 전자레인지에 60초간 .. Biology/생명 과학 | 공학 2022. 3. 1. 생명공학실험 | 온도, pH가 효소반응에 미치는 영향 TIP 전분 분해효소인 아밀라이제의 효소 촉매활성에 및는 요인들 중 반응 중의 온도와 pH가 효소활성에 미치는 효과를 관찰한다. 효소 생물학적 촉매로 주로 단백질이며 특정한 기준하고만 결합하여 반응을 촉매하는 기질 특이성을 가진다. 1. 효소반응에 영향을 주는 요인 ① 기질의 농도 : 기질의 농도에 비례하여 반응의 속도가 증가하고 일정한 기질 농도후에는 반응 속도가 감소한다. ② pH : 최적 pH에서 최대 반응속도를 나타낸다. pH가 변하면 단백질의 입체구조의 변화로 인해 효소의 촉매부위가 파괴된다. ③ 온도 : 일정 온도 이상 올라가면 반응속도가 떨어지는데 효소의 주성분인 단백질이 일정온도 이상에서 구조의 변화가 오기 때문에 효소의 기능을 상실하게 된다. 실험 방법 1. 온도에 따른 효소의 활성 1).. Biology/생명 과학 | 공학 2021. 11. 28. 생명과학실험 | 양파 표피세포의 삼투현상 관찰 세포막 (cell membrane) 세포막(cell membrane)은 외부 환경과 세포 내부를 분리시켜주는 생체막이다. 세포막은 세포를 외 부와 구분 짓고 다른 세포나 외부의 물질을 인식하는 등 다양한 기능을 한다. 세포막의 가장 중 요한 기능은 기체, 물, 이온과 유기물질에 대해 선택적 투과성(selective permeability)을 가지며 세 포 안팎으로의 물질의 이동을 조절하는 것이다. 이산화탄소나 산소와 같이 크기가 작고 극성이 없는 물질은 인지질 2중층을 바로 통과하지만 대부분의 물질은 막 단백질의 도움을 받아 이동한다. 반투과성 막(semipermeable membrane) 반투과성 막은 용매는 투과시키고 용질은 투과시키지 않는 막이다. 용액 속의 입자 중 막의 구멍 보다 크기가 작은 무.. Biology/생명 과학 | 공학 2021. 8. 19. 생명과학실험 | 단백질 발현과 정제 TIP 1. 단백질 발현의 목적 : 특정 유전자를 통해 얻고자 하는 단백질을 대량 생산할 수 있다. 2. 단백질 정제의 목적 : 단백질을 순도 높게 분리 및 정제함으로써 수많은 단백질 중 원하는 단백질만을 얻기 위함이다. 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 외부 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입하여 숙주 세포에 도 입하면 마치 숙주 세포의 유전자처럼 발현되는 기법이다. 알로락토오스와 유사한 IPTG를 이용해 Lac repressor와 결합하게 함으로써 lac operator와의 결합을 방해하 여 전사가 일어나도록 한다. 유전자 과발현 시 단백질의 정제가 쉬워지고 정제의 수율이 올라간다. 실험 방법 1. 단백질 발현 1) 알코올램프를 켜고 피펫을 사용해 kanamycin(항생제)을 일부 덜어 SB배양액에 넣고.. Biology/생명 과학 | 공학 2021. 8. 18. 생명과학실험 | Protein Purification과 Electrophoresis(SDS-PAGE) TIP 추출해낸 Protein을 Purification하여 원하는 단백질만을 얻어내는 방법을 알아보고, SDS-PAGE Gel을 이용해 Electrophoresis하여 직접 눈으로 확인한다. 친화성 크로마토그래피 (affinity chromatography) 1) 친화성 크로마토그래피는 단백질과 지지체 위에 결합되어 있는 ligand 사이의 특이한 화학적 상호작용에 기초로 하는 분리 방법 예) 효소-억제제, 항원-항체 반응 2) Ligand 와 단백질 사이의 친화성 결합은 분자의 크기와 모양에 특이적인 결합 (Specific binding) 3) Column 내 정지상에 단백질과 상호작용하는 ligand 를 결합시킨 지지체 사용 4) 친화성 크로마토그래피에서 ligand 를 붙일 때 고체 matrix 에.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 14. 생명과학실험 | DNA cloning와 전기영동 플라스미드(Plasmid)는 환상 DNA 분자들이며 독자적으로 염색체를 복제할 수 있고, 또 크기는 세균성 염색체 크기의 0.05-10%에 해당한다. 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니며 또 플라스미드는 다른 종의 세포 내에도 전달된다. 이러한 특성을 이용하여 플라스미드는 유전공학에 폭넓게 이용되고 있다. cDNA는 Complimentary DNA, 즉 상보적 DNA란 뜻이며, mRNA를 주형으로 하여 상보적인 DNA (cDNA)를 합성하는 효소인 Reverse Transcriptase를 mRNA에 A, T, C, G와 함께 첨가하여 적정 환경에 놓아두면 cDNA가 합성된다. 우선 mRNA를 r.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 13. 생명과학실험 | Protein purification TIP 가. 미생물을 이용하여 대량 생산하였던 원하는 단백질만을 특이적으로 정제하려고 한다. 나. soluble 상태의 sample protein을 affinity chromatography 방법을 이용해 target protein만 추출한다. Affinity chromatography 효소의 기질 특이성과 같이 선택적으로 분리를 원하는 물질과 반응하는 특성을 가진 물질을 고정상으로 삼아 분리시키는 크로마토그래피이다. 예를 들어 효소와 기질, 항원과 항체, 호르몬과 수용체, 렉틴과 다당류, 핵산의 염기쌍 등의 사이에 작용하는 특이적 상호작용을 이용하여 상호작용물질의 한쪽을 불용성 담체에 공유 결합시킨 것을 크로마토그래피용 고정상으로 하고 다른 쪽을 복잡한 혼합계 중에서 선택적, 그리고 가역적으로 포착하여.. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 7. 생명과학실험 | Tris-HCl buffer 만들기 TIP 1. Column chromatography의 준비로서의 buffer만들기 2. 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4 Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다. Buffer solution Buffer solutions는 적은 양의 산이나 염기를 첨가하거나 희석시킬 경우, 용액의 H+와 OH-의 농도 변화를 줄이기 위해 사용하는 용액이다. Buffer solutions는 약산과 그것의 짝염기로 이루어진 것이 일반적이며, 약염기와 그것의 짝산으로 이루어진 경우는 전자보다 적다. 용액의 pH변화에 저항하는 buffer solutions의 기능은 앞서 말한 약산과 그 짝염기의 평형에 의한 결과로, Le Chatelier의 .. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 9. 7. 이전 1 2 3 4 다음 반응형
