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  유전학실험 | Restriction enzyme digestion Treatment of Restriction Enzymes 제한효소를 이용한 절단은 적절한 반응조건하에서 DNA와 효소를 incubation시킴으로써 간단히 수행할 수 있다. 염 농도, pH, 반응온도, DNA 및 효소의 양 등이 효소반응의 변수로 작용한다. 제한효소의 1 Unit는 지정된 buffer와 지정한 온도에서 1시간 동안 λ DNA 1㎍을 완전히 분해하는데 필요한 양을 나타낸다. 1) 멸균한 200㎕ microtube에 다음과 같은 비율로 잘 혼합한다. 2) 37℃ incubator에서 약 2시간 정도 반응시킨다. 3) 전기영동하여 확인한다. 실험 방법 1. Protocol 1) 37℃ incubator에서 약 2시간 반응시킨 후 전기영동하여 확인한다. Plasmid DNA 16㎕ 10X R .. Biology/유전학 2024. 1. 9.

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  유전학실험 | gDNA extraction from human oral epithelial cells Genomic DNA Genomic DNA는 유전체(genome)을 구성하고 있는 긴 DNA 서열으로, 개체가 가지고 있는 유전 정보를 포함하는 모든 DNA를 총칭한다. 좁은 의미로는 플라스미드(plasmid) DNA 와 구분하여 세포 내 염색체(chromosome)를 구성하는 염색체 DNA를 의미하기도 한다. 일반적으로 진핵세포의 genomic DNA는 염색체가 위치하고 있는 세포핵(nucleus) 내부에 위치하며 긴 선형 염기 서열으로 구성되어 있다. Genomic DNA와 플라스미드 DNA는 서로 대비되는 성질을 가진다. 먼저 두 DNA는 서로 다른 구조를 가지는데, 플라스미드 DNA는 원형(circular) DNA 구조를 가지고 genomic DNA는 긴 선형(linear) DNA 구조를 가진다... Biology/유전학 2024. 1. 8.

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  유전학실험 | 초파리 염색체 관찰 - 거대 염색체 관찰 TIP 쌍시목 곤충의 애벌레에서 거대염색체를 관찰하여 염색체의 구조를 현미경으로 관찰한다. 초파리의 생활사와 염색체 초파리과 초파리속 에 속하는 파리 종류를 초파리라고 부른다. 초파리는 생활사가 짧고, 변이가 확실하여 유전학에서 연구재료로 많이 이용되고 있다. 초파리는 절지동물문 곤충강 유시아강 신시군 내시류 파리목에 속한다. 몸은 일반적으로 두부, 흉부, 목부의 3 부분으로 나뉘어지며, 두부에는 1쌍의 복안과 1쌍의 촉각, 3개의 단안, 3쌍의 부속지로 된 구기가 있다. 흉부에는 3쌍의 체절과 3쌍의 다리와 2쌍의 날개를 가진다. 복부는 원칙적으로 11체절로 되며, 보통 복부에는 다리를 가지지 않고, 제 8-10절에 생식기를 가진다. 곤충의 날개는 지구상의 각종 생태계에 적응함으로써 보다 다양한 형태로.. Biology/유전학 2022. 10. 17.

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  유전학실험 | Sex Chromatin 관찰 바소체 간기(間期) 시기에 진하게 염색되는 이질염색질(heterochromatin) 덩어리 로 불활성화된 X염색체를 말한다. 포유류에서 수컷은 하나의 X염색체를, 암컷은 두 개의 X염색체를 갖고 있다. 따라서 암컷에서 두 개의 X염색체 위에 있는 유전자가 모두 활성화되어 만들어진다면 하나의 X염색체를 갖고 있는 수컷보다 2배나 많은 양의 유전자 산물을 합성하게 된다. 그러나 이렇게 되면 불균형을 초래하여 정상적으로 발생을 하지 못한다. 따라서 유전자량 보정(dosage compensation)을 통하여 암컷의 X염색체 하나를 응축시켜서 불활성화시킴으로써 평형을 유지한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 뺨 안쪽을 이쑤시개로 긁어 구강상피세포를 얻는다. 2) slide glass에 얇게 smear한다. 3.. Biology/유전학 2021. 11. 17.

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  유전공학실험 | PCR과 Transformation TIP 유전자를 cloning하여 vector에 주입하여본다. 그리고, 대장균에 주입하여 발현 정도를 관찰한다. PCR DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, PCR과 여기서 파생한 여러가지 기술은 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다. 1970년대에 gene cloning기술의 개발은 이전에 불가능했던 방법으로 유전자와 유전자 활성에 대한 연구.. Biology/유전학 2019. 12. 11.

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  유전공학실험 | Plant Genomic DNA isolation TIP 1. 식물에서의 DNA 추출하는 방법을 안다. 2. Agaros Gel Electrophoresis 방법과 그에 따른 식물 DNA 양상을 안다. 식물의 DNA 식물은 진핵생물이므로 그 DNA 또한 진핵생물의 일반적인 DNA와 거의 유사하다고 할 수 있다. 최근에 이 식물세포가 동물과 거의 유사한 유전자의 구조와 기능을 가지고 있으나, 광합성 등 식물에 특이적인 기능에 관련된 유전자 및 유전현상 또한 많이 존재하고 있기 때문에 그러한 현상들을 근본적으로 분자의 측면에서 접근하는데 노력하고 있다. 또한 동물과 비교하여 식물은 외부유전자의 삽입을 통한 새로운 형질을 얻는 과정이 용이한 장점을 가지고 있다. 이러한 장점으로 인해 재조합 DNA기술을 이용하고 식물유전자를 cloning하여 유전자 조작 및 .. Biology/유전학 2019. 12. 3.

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  유전학개론 | 멘델과 유전 TIP 1. 멘델 2. 멘델의 법칙 3. 유전형질 중에서 멘델 법칙을 따르지 않는 상황 4. 멘델 유전학에 따르지 않는 현상 1. 멘델 오스트리아의 유전학자, 성직자. 가난한 농부의 아들로 태어나서 고학으로 성직자가 되었다. 1815년에 교회의 후원으로 빈 대학에서 물리학․화학․생물학․수학 등을 공부하였다. 그 뒤 브륀 국립 종합 학교에서 자연 과학을 가르치는 한편, 7년간에 걸쳐 교회 뜰에 완두를 가꾸어 유전에 관한 실험을 한 끝에 1863년에 멘델의 유전 법칙을 발견하였다. 2년 뒤 브륀의 자연 과학 협회의 정기 회의에서 그것을 발표하였다. 그러나 유전․진화 연구에서 참으로 획기적인 이 대발견은 알아 주는 사람이 없어 20세기까지 빛을 보지 못하였다. 1868년에 주교가 되었으나, 교회 과세법에 반대.. Biology/유전학 2019. 11. 25.

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  분자유전학실험 | CTAB을 이용한 DNA 추출 TIP 1. genomic DNA 추출 과정을 분자 유전학적으로 접근하여 이론으로 배운 DNA에 대해 직접 실험함으로서 기초적이지만 아주 중요한 이론을 확립한다. 2. DNA를 얻고자 CTAB buffer를 이용하여 개개인 혈액의 정제된 genomic DNA를 추출 할 수 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 시료 100㎕를 2㎖튜브에 넣고 CTAB buffer 800㎕, Proteinase K를 30㎕ 넣고 균질하게 섞이도록 vortex로 혼합, 65℃ 항온수조에서 30~60분간 항온처리하며 3~4회 혼합 2) phenol : chloroform : isoamyl-alcohol (25:24:1) 용액 800㎕를 넣고 실온에서 5분간 흔들어 준 후 10분간 12000rpm으로 원심분리 3) 새로운 1... Biology/유전학 2019. 11. 18.

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  분자유전학실험 | DNA ligation 1970년대 쯤 "유전공학(genetic engineering)"이라는 분야가 등장했다. 요즘에도 쓰이지만 이 말은 "유전자 재조합 기술(recombinant DNA technology)"를 의미한다. 이러한 재조합 분자를 생성하기 위하여 클론 될 DNA뿐만 아니라, 벡터도 통제된 방법으로 특정한 지점에서 절단된 후 함께 연결되어야 한다. 절단과 연결은 최근 몇 년 동안 다양하게 발달해 온 DNA조작 기술의 두 가지 예이다. 절단과 연결뿐만 아니라 DNA분자를 짧게 혹은 길게 할 수 있으며 RNA나 새로운 DNA 분자로 사본할 수 있고, 특별한 화학기능기를 첨가 혹은 제거함으로써 수정할 수도 있다. 시험관 속에서 수행할 수 있는 이러한 모든 조작들은 유전자 클로닝뿐만 아니라 DNA생화학, 유전자 구조, .. Biology/유전학 2019. 11. 10.

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  유전학실험 | 혈액을 통해 유전자 검사하는 과정 채혈 1. 소독을 위해 70% isopropyl alcohol이 권장되며 채혈할 부위를 중심으로 바깥쪽으로 원형을 그리듯이 닦아낸다. 소독약이 마르지 않았을 때 채혈을 하면 용혈이 발생하므로 소독약이 완전히 마른 후에 채혈을 실시한다. 2. 압박대는 소독약이 마른 후 채혈 직전에 사용하거나, 묶은 상태로 1분 이상 방치해서는 안된다. 3. 채혈은 바늘 굵기가 18-23G인 주사기를 사용하거나 상품화된 진공채혈관과 일회용 채혈바늘을 사용하여 실시한다. 4. 주사기를 사용하여 채혈할 때는 주사바늘의 사면이 위로 향하게 하여 채혈하고자 하는 정맥에 찌른다. 5. 정맥내에 주사바늘이 들어갔음을 확인하고 지혈대를 푼 후에 혈액을 채취한다. 이때 혈액채취를 빨리하면 피가 잘 나오지 않거나 적혈구가 용혈되는 경우가 .. Biology/유전학 2019. 10. 28.

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  유전학실험 | subcloning I(digestion) TIP 우리가 확인하고자 하는 promoter의 활성을 측정하기 위한 실험과정중 하나로써, 이미 vector에 붙어있는 promoter에서 일부분을 자르기 위해 vector를 restriction enzyme(restriction endonuclease)을 이용하여 잘라낸 후 그 크기들을 확인한다. 1. genomic DNA와 plasmid DNA의 차이 2. subcloning 3. electrophoresis 4. restriction enzyme 5. promoter gene & reporter gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) plasmid DNA인 pMB01을 준비한다. 2) Microfuge tube에 DDW 12.5㎕, DNA(pMB01) 5㎕, enzyme(BamHI)을 일정량 넣고.. Biology/유전학 2019. 10. 24.

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  유전학실험 | 초파리의 단성잡종 교배 단성잡종교배 한 쌍의 대립유전자에 차이가 있는 양친 사이의 교배를 말한다. 사실상 두개체가 여러 형질에서 차이가 있을 수 있으나 조사대상은 한 쌍의 대립유전자에만 국한된다. 완두의 키가 큰 것과 작은 것의 교배는 단성 잡종교배인 것이다. 분리의 법칙은 양친의 유전자형을 알고 있을 때 앞으로 기대되는 유전자형과 표현형의 비율을 계산하는데 사용될 수 있다. 그와 같은 교배의 결과를 결정하는 한 가지 방법은 퍼넷 사각형을 이용하는 것이다. 이는 아주 간단한 방법으로 1900년대 초에 유전분야에서 유명한 퍼네트에 의해 고안된 방법이다. 웅성배우자의 가능한 모든 종류는 횡축에 자성배우자의 가능한 모든 종류는 종축에 놓았을 때 양 배우자들의 조합방법은 각 해당 칸을 채움으로서 결정된다. 결과에서 예상 표현형의 비는.. Biology/유전학 2019. 10. 16.

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  유전학실험 | UV조사를 이용한 B-W균주의 돌연변이 유도 및 효소활성 미생물의 종류에 따라 적절한 배지를 선택하여 사용해야 하기 때문에 배지의 종류와 각종 배지의 제조방법들을 배워서 미생물의 생육조건과 사용목적에 따라 적합한 배지를 선택해야 한다. 그리고 세균 배양에 필요한 영양소가 포함된 배지를 만들어 목적 세균을 증식시킬 수 있고 완벽하게 멸균하기 위해 고압증기 멸균방법을 알아본다. 또한 UV를 이용하여 돌연변이를 유도해 생성되는 결과물을 관찰하고 돌연변이 된 균주와 모체의 차이점을 알 수 있는 실험법에 대해 알아보고, 효소 활성 확인 배지에서 효소활성여부 결과를 확인해본다. 모체와 돌연변이체의 차이점 첫 번째로 DNA 염기서열 차이가 있는데 돌연변이가 생기게 되면 DNA의 염기서열에 변화가 일어나서 문제가 발생되며 변화가 생긴 염기서열이 복제가 되면서 모체와는 다른 .. Biology/유전학 2019. 10. 9.

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  분자유전학실험 | 알칼리 세포파괴 방법에 의한 플라스미드 DNA의 분리 TIP 1. Plasmid DNA 2. Plasmid DNA 분리 3. RNA is structurally very similar to DNA. How can you remove RNA during plasmid isolation? 4. How do you break the cell membranes? 5. What is the role of ethanol in the current experiment? 6. How do you determine the concentration of the plasmid isolated using UV/Vis spectrometry? 7. 실험 기구 및 시약 8. 실험 방법 Plasmid DNA 염색체 밖에 존재하는 DNA이다. plasmid DNA는 그 자체 내에 re.. Biology/유전학 2019. 9. 4.