반응형 일반생물학실험 | DNA 추출 TIP 플라스미드라는 유전체이외의 자가복제 DNA의 분리를 통하여 DNA의 추출 및 정제방법의 원리를 배우고, DNA의 이화학적 특성을 이해한다. DNA의 발견1869년 스위스의 화학자인 미셔는 고름에서 채취한 백혈구 핵의 단백질 을 펩신으로 분해한 결과 인을 함유한 물질이 남는 것을 발견하고, 이 물질이 유전 물질일지도 모른다고 추측했다. 그 후 1914년에 독일 화학자인 포일겐은 DNA의 양에 따라 세포핵의 염색 정도가 달라지는 ‘포일겐의 염색법’을 발명하여 DNA의 양을 계산하였다. 그 결과 한 생물체 내의 세 포핵은 모두 같은 양의 DNA를 가지고 있으며, 난자와 정자는 그 절반만 을 가지고 있다는 것을 밝혔다. DNA의 존재가 알려졌음에도 불구하고 1940년대까지 많은 과학자들은 조성이 단.. Biology/일반 | 세포 생물학 2024. 6. 10. 유전학실험 | Restriction enzyme digestion Treatment of Restriction Enzymes 제한효소를 이용한 절단은 적절한 반응조건하에서 DNA와 효소를 incubation시킴으로써 간단히 수행할 수 있다. 염 농도, pH, 반응온도, DNA 및 효소의 양 등이 효소반응의 변수로 작용한다. 제한효소의 1 Unit는 지정된 buffer와 지정한 온도에서 1시간 동안 λ DNA 1㎍을 완전히 분해하는데 필요한 양을 나타낸다. 1) 멸균한 200㎕ microtube에 다음과 같은 비율로 잘 혼합한다. 2) 37℃ incubator에서 약 2시간 정도 반응시킨다. 3) 전기영동하여 확인한다. 실험 방법 1. Protocol 1) 37℃ incubator에서 약 2시간 반응시킨 후 전기영동하여 확인한다. Plasmid DNA 16㎕ 10X R .. Biology/유전학 2024. 1. 9. 분자생물학실험 | Restriction digestion TIP 1. Plasmid DNA를 restriction enzyme(제한효소)로 처리하여 restriction enzyme의 특성과 plasmid의 특성을 이해한다. 2. Agarose gel 전기영동의 원리를 이해하고, 크기와 모양에 따른 DNA의 위치를 통하여 제한효소 지도를 작성한다. 실험 배경 restriction enzyme은 특이성에 따라 DNA의 특정한 site를 찾아서 잘라준 다. 이 실험에서 쓰이는 enzyme은 DNA상에서 특정한 site를 인식하여 T 와 C사이의 phosphodiester bond를 끊어준다. 그렇게 끊어주면 circular한 plasmid DNA는 잘려서 linear한 형태로 나타난다. agarose gel electrophoresis은 DNA 조각을 분리하고 인.. Biology/분자생물학 2023. 5. 17. 일반생물학실험 | 침샘 염색체 관찰 TIP 1. 초파리에서 침샘을 꺼내어 침샘 염색체를 관찰할 수 있다. 2. 침샘 염색체가 다른 염색체보다 크기가 큰 이유를 설명할 수 있다. 염색체의 구조 진핵세포의 간기 핵으로부터 분리된 염색질 에서는 염색체의 형태를 찾아 볼 수 없으며 , 대신 불규칙적으로 모여 있는 핵단백질이 관찰된다. 핵단백질은 많은 DNA와 소량의 DNA를 포함하고 있는 단백질로 구성되어 있다. 이들 단백질은 염색질의 중요한 구조적 역할을 하는 염기성의 히스톤 단백질과 DNA나 RNA 합성 등에 관여하는 비 히스톤 단백질로 되어 있다. DNA 2중 나선의 모양을 띄고 있다. DNA가 히스톤 단백질과 결합하여 뉴클레오솜 형성하며, 뉴클레오솜이 코일 모양으로 감겨 30nm 폭의 염색사를 형성한다. 염색사가 응축되어 굵은 염색체 가닥.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 10. 24. 일반생물학실험 | 플라스미드 추출 플라스미드는 생장에 필수적인 염색체이며 DNA에서 물리적으로 분리 돼 있는 대표적인 에피솜 DNA분자라고 한다 1953년에 미국의 유전학자 레더버그가 처음으로 플라스미드를 세균의 염색체 말고 독자적으로 증식을 할 수 있는 DNA 분자라는 의미로 이름을 지었다고 한다. 쉽게 말하면 플라스미드는 세균에서 발견이 되는 염색에 이외에 DNA이고 고리모양의 이중가닥 DNA 모양으로 수천개에서 수만개의 염기쌍으로 이루어져 있다고 한다. 하나의 세포내에 여러 개 존재하고 염색체와는 독립적으로 복제가 된다는 게 특징이다. 또 생존에 필수적이지는 않지만 특정한 환경에서 생존을 하는데 유리한 유전자들이 존재한다. 또 세균에 존재하지만 효묘와 같은 진핵 생물에서도 발견이 된다고 한다. 플라스미드의 형태로는 원형 DNA의 한.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 9. 28. 일반생물학실험 | 형질 전환 - 박테리아 유전자 TIP 대장균의 형질 전환 실험을 통해 형질 전환의 원리와 개념을 이해한다. 형질 전환(Transformation) 유전물질인 DNA를 다른 계통의 살아 있는 세포에 주입했을 때, DNA가 그 세포에 들어가 유전형질(遺傳形質)을 변화시키는 현상. 형질 전환은 1928년 F. 그리피스의 폐렴균(肺炎菌)을 이용한 실험과 함께 알려졌다. 그리피스는 폐렴균 중에서 다당류(多糖類)로 이루어진 두꺼운 막(협막〈莢膜〉)을 갖는 병원성(病原性)의 세포(S형균이라 부른다)를 가열하여 죽인 다음, 같은 종의 균의 돌연변이체(突然變異體)로서 협막을 갖지 않는 비병원성 세포(R형균이라 부른다)와 섞어서 쥐에게 주사하여, 쥐는 발병(發病)해 죽고, 시체에는 열에 의해 죽었을 S형균이 출현하는 것을 발견하였다. 실험 방법 1. .. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 6. 19. 세포생물학실험 | SDS-Page TIP SDS-PAGE는 DNA를 전기영동으로 분리하여 크기를 알아보듯이 단백질도 SDS를 이용하여 전하는 모두 잃게 하고 크기에 의해 분리되게 만들어 전기영동을 통해 단백질의 크기를 알아본다. Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)는 단백질을 정제하는 동안 이를 monitor하고, 정제된 단백질의 동질성(homogeneity)을 알기 위한 가장 좋은 방법이다. SDS-PAGE는 일반적으로 단위체의 분자량을 결정하고, 정제된 단백질의 단위체 구성을 알기 위해 사용된다. SDS-PAGE는 더 깊은 연구를 위한 충분한 단백질을 얻기 위해 scale up될 수 있다. 실험 방법1. 실험 과정1) 각 lane 별로 30㎕.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 4. 30. 일반생물학실험 | 유기화합물 TIP 1. 수수깡 및 여러 가지 재료를 이용하여 유기화합물의 특징과 구조를 알아본다. 2. 수수깡을 이용하여 DNA 구조를 만들어 본다. 탄소를 포함하는 화합물은 유기화합물이다. 대부분의 유기화합물은 탄소, 수소, 질소와 같이 적은 종류의 원소로 이루어져있는데 다양한 금속의 결합으로 특징들이 다양해 질 수 있다. 유기화합물은 사슬식 화합물과 고리식 화합물로 나눌 수 있다. 또 고리식 화합물은 탄소 원자만으로 고리가 구성되어 있는 탄소 고리식 화합물과 탄소 이외의 원소를 고리안에 포함하는 헤테로 고리식 화합물로 분류 할 수 있다. 탄소 고리식 화합물은 지방족 고리식 화합물과 벤젠 고리를 포함하는 방향족 화합물로 분류 할 수 있다. 수용액 상태에서 이온으로 해리하는 무기 화합물과는 달리 대부분의 물에 녹지.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 8. 19. 일반생물학실험 | DNA & RNA 구조의 이해 TIP 모형을 통해 DNA와 RNA의 구조를 확인하고 computational prediction을 통해 외가닥 RNA의 2차 구조를 예측할 수 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 그림 자료를 오려 붙여 DNA모형을 만든다. 2) 구조 예측 프로그램을 통해 외가닥 RNA의 구조를 예측한다. 3) 예측한 RNA의 구조를 그림 자료를 오려 붙여 모형으로 만든다. 4) 문제의 해결과 Nucleic Acid의 3차원적인 입체 구조의 이해를 위해서 첨부된 자료를 이용하여 DNA와 RNA를 만들어 봅시다. ① 그림자료 1, 2, 3을 각 각10장씩 두꺼운 마분지류에 복사하거나, 복사 후 두꺼운 종이에 깨끗하게 붙인 후 지시된 선을 따라 잘 오려 낸다. 점선 부분은 계단모양으로 표시된 산 과 골을 맞추어서 접는다.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 3. 1. 일반생물학실험 | Mini preparation TIP DNA의 크기차이에 의해 분리하는 방법인 alkaline lysis method를 이용하여 정제된 DNA의 양을 불린다. 유전자 재조합은 DNA를 목적에 따라 적절히 자르고 붙여서 유전물질을 원하는 형태로 개조시키는 과정이다. 가장 기본적인 DNA조작기법인 재조합DNA(recombination DNA) 기술은 필요로 하는 외부 DNA단편을 vector라고 부르는 운반자 plasmid DNA분자에 연결시켜 목적으로 하는 DNA부분만 증폭시킬 수 있는 새로운 재조합 DNA를 만드는 것이다. 즉, 제한효소를 사용하여 목적 DNA와 plasmid DNA를 잘라 이 두 분자를 ligase를 사용하여 연결시키는 것이다. 이렇게 반응시킨 DNA용액을 대장균에 형질전환 시킨다. 이 때 원하는 DNA분자가 만들어.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 1. 30. 일반생물학실험 | 대장균 DNA의 추출과 정량 본 실험은 대장균(Escherichia coli)의 DNA(deoxyribonucleic acid)를 추출하고, 겔 전 기영동법(gel electrophoresis)으로 DNA의 추출 여부를 알아보고자 하는 실험이었다. 먼저 Escherichia coli 배양액에서 Escherichia coli를 원심분리하여 얻었다. supernatant를 제거 한 후, Escherichia coli를 EDTA, SDS, NaOH 용액 등으로 세포벽과 단백질 등을 파괴한 다. 그 후 NaCl과 etahnol을 넣어 DNA를 농축시켜 얻는다. 이렇게 얻은 DNA를 RT에서 hydration 시킨 후 gel electrophoresis를 이용해 DNA의 상대적 질량, 양 등을 알아보았다. 그리고 gel electrophor.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 30. 일반생물학실험 | 박테리아의 형질전환(Transformation) TIP 박테리아에 존재하는 플라스미드 DNA에 대해 이해하고, 이를 유전공학적으로 조작한 실험용 플라스미드를 이용해 박테리아의 형질전환을 유도해 봄으로써 유전자 재조합의 기초를 이해한다. 형질전환 형질전환(transformation)은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적 성질을 변하게 하는 일을 말한다. 이는 1928년 영국의 그리피스가 Diplococcus pneumonia를 이용하여 실험한 것이 계기가 되어 발견된 실험 방법이다. 세포는 외부의 DNA를 받아들임으로써 원래 갖고 있는 성질과는 다른 새로운 유전형질을 발현할 수 있게 된다. Transformation 에서는 외부의 DNA를 벡터를 이용해 bacteria cell에 주입해 준다. 이러한 벡터를 이용한 외부 DNA를 세포에 주입.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 12. 20. 일반생물학실험 | DNA 모형 제작 TIP 유전 정보를 가지고 있는 DNA의 중요성을 알고, 그 모형을 제작해 봄으로써 DNA의 구조를 이해한다. DNA(Deoxyribonucleic acid) : 유전자를 포함하는, 정보를 갖고 있는 유전물질 1. DNA의 구성요소 ① 기본단위 : 뉴클레오티드 → 당 + 인 + 염기 ② 염기의 종류 : 퓨린계: 구아닌(G), 아데닌(A), 피리미딘계 : 시토신(C), 티민(T) 2. DNA의 구조 ① 구아닌(G)과 시토신(C)의 3중수소결합, 아데닌(A)과 티민(T)의 2중 수소결합 ② 인산디에스테르결합으로 폴리뉴클레오티드 사슬형성 ③ 2중가닥이 꼬여서 2중 나선구조형성 생물학의 중심원리(Central Dogma) 유전현상(DNA가 단백질로 번역되는 일련의 과정)의 핵심이 되는 ‘유전정보의 흐름’을 지칭.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 7. 11. 생화학실험 | Purification of Plasmid DNA TIP Bacteria의 plasmid에 대해 알아보고 DNA의 구조에 의한 추출 원리를 이해한다. Plasmid 세균세포내에서 염색체와 독립적으로 존재하며 증식할 수 있는 환형DNA. 모든 플라스미드는 복제 개시점이 될수 있는 적어도 한 개의 DNA염기서열을 가지며 큰 플라스미드는 자체에 복제 효소를 가지기도 한다. 세균의 생존에 필수적인 유전정보를 가지고 있는 것은 아니지만 플라스미드에서 약제에 대한 저항성을 가진 내성인자,세균의 자웅을 결정하는 성결정인자등이 발견되고 있다. 제한효소로 고리를 끊은 뒤, 진핵생물의 DNA를 삽입하여 잡종 플라스미드를 만들어도 세균안에서 정상적으로 작동하고 증식하며, 이를 이용한 유전자 재조합을 통해 유용한 단백질을 얻을 수 있다. Vector 필요한 유전자를 잘라내어.. Biology/생화학 2020. 5. 19. 일반생물학실험 | DNA 추출 및 PCR TIP 쥐의 근육세포에서 DNA를 추출하여 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction : PCR) 실험에 이용할 product를 만들고 전기영동으로 그 결과를 확인한다. DNA 복제 DNA가 단백질의 아미노산 배열순서를 결정하는 것은 먼저 DNA 2중나선의 일부분이 풀리고, 풀린 두 외가닥 사슬의 어느 한쪽 사슬에서 전령 RNA(messenger RNA:mRNA)가 만들어진다. 이 mRNA는 DNA와 마찬가지로 염기-펜토오스-인산으로 된 뉴클레오티드의 기다란 연결체인데 펜토오스가 리보오스이며, 염기의 종류가 A,G,C 그리고 U(DNA의 T 대신 U이다)인 점이 다르다. 또 DNA처럼 2중나선이 아니고 외가닥 사슬로만 존재한다. DNA의 한 쪽 가닥 위에서 만들어진 mRNA는 그 염.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 4. 22. 일반생물학실험 | Agarose gel 만들기 및 DNA electrophoresis TIP 1. 전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과차이를 이해한다. 2. Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기에 다라 다르므로 매질 내에서 종류에 따라 분리하게 되며 전기영동은 DNA의 크기에 따른 분리를 한다. DNA 전기영동의 원리와 특성 DNA 분자 연구를 위해 겔 전기영동(gel electrophoresis)이 많이 사용된다. 이 기술에서는 겔을 사용하는데, 겔은 크기, 전하량, 기타 물리적 성질에 기초하여 핵산이나 단백질을 분리한다. 핵산은 인산기에 의해 음전하를 띠기 때문에, 전기장 내에서 양극으로 이동한다. 핵산이 전기장 속에서.. Biology/일반 | 세포 생물학 2020. 4. 9. 분자생물학실험 | 대장균의 형질전환 형질전환 Transformation(형질전환)이란 외부 DNA를 host cell(숙주 세포) 내에 넣어주어 세포가 원래의 성질과는 다른 새로운 유전형질을 추가로 얻게 되는 것이다. 모든 종의 세포에서 자연스럽게 일어나는 것이 아니고, DNA 흡수와 결합에 관련된 세포 표현 단백질인 수용성 요소를 가지고 있는 competent cell에서만 transformation 된다. E. coil의 형질전환은 초기에는 발견이 되지 않았으나 bacteria를 차가운 CaCl2로 처리한 다음 잠시 heat shock 하면 bacteriophage λ가 세포 내로 들어가 phage를 형성한다는 사실에 의해 처음 관찰되었다. 이와 같은 처리는 bacteria의 세포막이 DNA가 infection 될 수 있는 compet.. Biology/분자생물학 2020. 2. 14. 생명과학실험 | 타선 염색체 관찰과 핵형분석 TIP 초파리의 타선염색체를 이해하고 관찰한다. 세포분열의 과정들을 관찰한다. 유전정보는 DNA에 저장되고 DNA를 통해 후대로 전해진다. 모든 생물의 세포는 DNA를 포함하고 있다. 진핵생물의 경우 이 DNA가 존재하는 곳은 핵이다. DNA는 핵 안에서 히스톤단백질과 함께 염색체를 이루고 있다. 염색체는 유전정보를 지니고 있는 실 같은 구조다. 이 염색체는 생물체의 종류마다 다르지만 인간의 경우 46개의 염색체를 가진다. 염색체의 구조를 살펴보면 복제를 했을 경우 두 개의 염색분체와 동원체로 이루어져 있다. 동원체는 세포분열 후기에 딸 염색체가 서로 붙어 있는 영역이고 염색분체는 염색체가 세로로 분열할 때 그 염색체의 한 가닥이다. 생물은 세포와 외부와 물질 교환을 효율적으로 하기 위해 하나의 세포가 .. Biology/생명 과학 | 공학 2020. 2. 11. 이전 1 2 3 다음 반응형
