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  미생물공학실험 | 미생물 배양 배지 제작 및 세균배양 TIP  미생물을 배양할 수 있는 배지를 만들어 보고 직접 세균을 배양해 본다.   미생물 배양미생물을 인공적으로 증식시키는 것을 배양이라고 한다. 진균, 세균, 랩토스피라 등은 무세포 배지에서 배양되지만 리케치아, 바이러스는 무세포 배지에서는 증식되지 않으므로 살아 있는 세포를 필요로 하는데, 부화란배양법, 조직배양법 등에 의해서 배양된다. 세균을 배양할 때에는 균종에 따라 각각 최적조건의 배지 선택이 중요하지만 바이러스, 클라미디아, 리케치아의 경우에는 최적세포의 선택이외에 숙주세포의 생명을 잘 유지하면서 배양해야 한다.  실험 방법1. 실험 과정1) LB Agar 분말 8g을 증류수 200mL에 넣는다. 2)  121℃, 1.5atm, 15-20 min 멸균조건으로 멸균한다. 3)  멸균된 배지를 .. Biology/미생물학 2024. 10. 2.

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  미생물학실험 | 멸균법 멸균(sterilization) 살균, 병원체 및 그 외의 미생물을 물리적, 화학적 방법의 자극을 가하여 죽이는 일 멸균 방법 1. 물리적 소독 멸균법 열, 압력, 증기 또는 전기적 에너지를 이용하여 모든 미생물을 파괴, 억제하는 방법으로, 일반적인 기구와 방포 및 물품 등을 소독, 멸균할 때 흔히 이용된다. 증식능력이 있는 미생물이나 곰팡이 등이 존재하지 않는 상태(무균상태)로 만들어 내는 과정. 2. 화학적 소독멸균법 화학약품이나 가스를 사용하여 미생물을 파괴하거나 성장을 억제하는 방법으로 열소독을 할 수 없는 기구나 물품을 소독, 멸균할 때 이용된다. . 실험 방법 1. 실험 과정 1) 멸균기를 거치지 않은 대장균과 멸균기를 거친 대장균을 루프 앤 니들을 사용하여 각각의 배지에 묻힌다. 2) 신체 .. Biology/미생물학 2023. 8. 1.

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  보건환경미생물실험 | 수소 이온 농도(Hydrogen Ion Concentration) TIP 1. pH 미터를 통해서 검수의 pH값을 측정하고, 검수에 들어 있는 수소 이온의 농도를 측정한다. 2. 측정한 값을 통해 검수의 산의 정도(수소의 활동도)를 파악하고, 사용 여부를 알아낸다. 측정 원리 반응물이 산 또는 염기인 경우에는 적정법을 이용하여 농도를 측정할 수 있다. 적정법은 농도를 정확하게 알고 있는 용액과 반응하는 다른 용액의 부피를 정확하게 측정하는 데 쓰인다. 이 방법은 반응물 사이의 몰 관계를 이용한 부피분석이라고 할 수 있다. 보통 적정법에서는 온도와 부피를 정확하게 알고 있는 표준용액에 지시약을 넣고 미지농도의 시료용액을 반응이 완결될 때까지 넣어 미지농도의 시료용액의 부피를 정확히 측정한다. 이때 지시약은 반응이 완결되는 시점에서 색변화를 일으킨다. 산-염기 적정에서 산.. Biology/미생물학 2023. 4. 4.

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  미생물실험 | Gram staining과 현미경을 이용한 관찰 TIP 현미경을 이용하여 gram staining을 한다. Gram positive 와 negative bacteria의 차이점 특 성 Gram 양성균 Gram 음성균 1. 세포벽 구조 두께(15∼80nm), 단층(single layer) 두께(15∼80nm), 삼층(triple layer) 2. 세포벽 조성 저지질(1∼4%). Peptidoglucan은 단층에 존재한다. 주성분은 세균 세포의 건물량의 50% 이상, teichoic acid가 있다. 고지질(11∼22%). Peptidoglucan은 내부 강인층에 존재한다. 주성분은 세균 세포의 건물량의 10% 정도, teichoic acid가 없다. 3. Penicillin에 대한 감수성 보다 많은 감수성이다. 보다 적은 감수성이다. 4. 염기성 색소에.. Biology/미생물학 2023. 3. 23.

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  미생물실험 | 균주 순수 분리 및 배양(Streaking, Spreading, Subculture) TIP 세균이 혼합된 시료로부터 단일 콜로니로 순수 분리하는 방법과 계대 배양하는 방법을 통해 single colony를 분리해 본다. 도말 자연 상태에서는 여러 종류의 생물종이 섞여 자라는데, 이러한 경우 한 종의 미생물을 연구하기 힘들다. 따라서 종의 특성을 연구할 때는 단일세포에서 자라난 세포 집단인 순수 배양체(pure culture)가 필요한데, 이를 얻는 방법이 도말이다. 도말에는 도말평판법과 획선평판법이 있는데, 도말평판법은 배지에 골고루 펴발라 도말하는 방법이고, 획선평판법은 한쪽 끝을 멸균하고 그곳의 접종원을 두 번째에서 멸균하는 과정을 반복하는 방법이다. 실험 방법 1. streak plate method 1) 미리 준비해 둔 LB plate의 온도가 실온이 될 때까지 실험대 위에 꺼낸.. Biology/미생물학 2022. 12. 31.

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  미생물실험 | 장내세균의 분리동정 TIP 사람의 장내세균을 분리하고 동정해 본다. 서론 사람의 몸속에는 수많은 세균이 있는데 그 중에서 장 내용물과 분변 중에는 1g당 10¹¹개 이상의 세균이 존재한다. 장내세균(Enterobacteria)은 동물의 장관 속에 기생하는 세균으로 대장균·장구균·젖산균·포도상 구균·진균 등이 있다. 그람음성의 간균으로서 아포를 형성하지 않으며 포도당을 분해하는 능력과 질산염을 아질산염으로 환원하는 능력이 있다. 장내세균 중 대장균(Escherichia coli)은 사람이나 온혈동물의 장내 기생하는 세균이다. 대부분 비병원성이지만 일부는 사람과 어린 동물에게서 다양한 장 질병과 설사 증상을 유발하는 것으로 밝혀져 있다. 대장균의 존재는 분변에 의한 오염의 지표가 되며, 수질검사 등에 종종 응용되기 때문에 위생.. Biology/미생물학 2022. 12. 27.

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  식품미생물학실험 | Aspergillus niger과 Aspergillus oryzae 의 배양 TIP Aspergillus nigerds MEA 배지를 이용하고 Aspergillus oryzae는 PDA배지를 이용하여 곰팡이를 배양하고 배양하고 난 뒤 각 곰팡이의 색깔, 모양, 포자 등을 관찰 할 수 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) MEA와 PDA배지에 분반,조,이름을 작성한다. 2) 백금이를 bacti-cinerator로 15초 정도 멸균시켜주고 알코올램프를 이용해 백금이의 앞쪽 동그란 부분이 빨개질 때 까지 가열해 준다. 3) 그리고 열을 충분히 식혀준다. 4) Aspergillus oryzae 배양부터 시작한다. 5) 배지 안에 있는 균주인 Aspergillus oryzae를 백금이로 살살 긁어주고 PDA배지 가운데에 살살 streaking 해주었다. 6) 백금이를 다시 bacti-c.. Biology/미생물학 2022. 11. 17.

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  식품미생물학실험 | 미생물 배양 실험 TIP 1. 배지 조제 및 배양 2. 토양세균 분리 및 배양(bacillus) 3. 현미경 검경 4. 유산균 배양 후 총균수 측정 5. 대장균 배양 6. 곰팡이 배양 7. Gram 염색 배지 조제 및 배양 1. Na배지 만들기 1) 삼각 플라스크에 2.3g의 nutrient agar를 넣어 증류수로 100㎖ 맞춰 희석 시켜준다. 2) 희석 시킨 후 고무마개로 막고 호일로 마개를 감싸 준 후 auto clave에 넣어 121℃ 15분간 고압 증기멸균을 시킨다. 3) 살균이 된 na 배지를 clean bench에 가져가 petri dish에 적정량을 넣어 뚜겅을 열어둔 상태에 서 통풍장치를 통해 식히며 굳히면 평판 배지가 된다. 2. 사면 배지 만드는 법 1) na를 증류수로 희석 시킨 다음 test tub.. Biology/미생물학 2022. 11. 16.

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  미생물제어 | 식품미생물 제어법 TIP 미생물 제어는 여러 조작이 있으나 이들 조작의 주된 것을 단위 조작으로서 정리하면 제균, 살균, 정균, 격리(차단)으로 나누어 볼 수 있습니다. 미생물 제어를 위한 기기는 이들 단위조작을 단일 기능 혹은 다른 단위 조작을 복수 조합하여 기능할 수 있게 만드는 것입니다. 이번 호에서는 미생물 제어를 위한 기본 단위 조작에 관해 알아보도록 하겠습니다. 제균 식품공장의 미생물 제어에서 제균방법은 균의 제거, 분리, 흡착 등이 있습니다. 구체적으로는 세정(제거), 여과, 침강, 원심분리(이상 분리), 전기 집진(흡착) 등이 사용되고 있습니다. 살균 살균은 크게 가열살균과 비가열살균(냉살균)으로 나누어 볼 수 있습니다. 1. 가열살균 1) 습열․건열 살균 : 피가열물의 전도에 따라 가열 2) 저온․고온 살.. Biology/미생물학 2022. 11. 9.

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  미생물해양학실험 | PCR TIP 1. PCR과 전기영동법을 이해하고 증폭된 DNA를 관찰하기 위해 실험을 시행함. 2. PCR의 기본 원리와 필요한 성분 및 방법에 대해 조사해보자. 먼저 PCR을 우리말로 바꾸면 중합효소연쇄반응이다. 중합효소연쇄반응(PCR)은 관심 있는 DNA서열을 수백만 벌이나 신속히 생성할 수 있는 기술로, 대장균이나 효모 같은 생물을 쓰지 않고 일정한 Cycle을 반복하여 DNA의 양을 증폭시키는 기술이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있다. 특정 DNA 서열을 증폭하기 위한 방법을 고안하여.. Biology/미생물학 2022. 10. 13.

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  미생물학실험 | Escherichia coli의 순수 분리 및 배양 미생물에 대한 연구 시, 미생물의 생태적, 생화학적, 분자생물학적 등 다양한 생물학적 특징을 밝혀야 하며 이를 위해 목표하는 미생물을 순수 분리하고 배양할 필요가 있다. 다른 종류의 생명체가 섞여 있지 않은 단일 종의 미생물의 배양을 순수 배양이라 하며, 적절한 환경에서 다른 미생물의 노출 및 오염 없이 배양해야 한다. 미생물의 배양은 미생물의 먹이가 되는 배지(media)를 이용하며, 배지의 상태에 따라 액체 배지와 고체 배지로 나눈다. 본 실험에서는 Luria Bertani media (이하 LB 배지)를 이용하여 실험하였으며, LB배지는 Escherichia coli (이하 E.coli)의 생장에 필요한 질소, 탄소, 비타민, 및 무기염류 등을 제공한다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 액상의 LB.. Biology/미생물학 2022. 9. 25.

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  미생물생리학실험 | Plasmid Vector 추출 TIP 다양한 vector의 종류 및 쓰임, 추출방법을 익히고, plasmid 추출 kit를 이용하여 직접 plasmid를 추출해본다. Alkaline Lysis 원리 높은 pH의 Alkaline 용액 상태에서 염색체 DNA와 plasmid DNA의 크기 및 topology에 의해 염색체 DNA와 혼합된 상태로부터 plasmid DNA만 분리한다. Alkaline 상태의 Anionic detergent 용액에서 detergent에 의해 세포가 용해된 후 염색체 DNA 와 plasmid DNA 모두 Alkaline 용액에 노출되면 두 형태의 DNA는 모두 변성된다. 이후 산성용액을 혼합하면 염색체 DNA는 크기가 너무 커서 변성 전 정상적인 Topology로 복원되지 못하고 더욱 엉기는 반면 Plasmid.. Biology/미생물학 2022. 9. 24.

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  병원미생물학실험 | Herpesvirus의 Plaque assay Plaque assay 1952년 Renato Dulbecco는 plaque assay를 응용하여 bacterial virus stock의 titer를 측정하는 방법을 최초로 개발하였다. Plaque란 바이러스감염에 의하여 세포 변성을 일으킨 단층세포부위로서, plaque 주위의 감염되지 않은 정상세포는 vital dye로 염색되므로 구별된다. 각 세균마다 특징적인 colony가 만들어지듯이 각 바이러스마다 크기와 모양이 다른 특징적인 plaque가 생성된다. 한 개의 감염성이 있는 바이러스입자는 하나의 plaque를 형성한다는 이론 하에 plaque counting은 각종 바이러스의 정량에 응용되었으며, Dulbecco는 1975년 노벨 생리학상을 받음으로서 plaque assay의 중요성이 입증되기도.. Biology/미생물학 2022. 9. 17.

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  미생물학실험 | Gram-Stain TIP 여러 미생물을 가지고 그람염색을 해본 후 그람음성도에 따라 분류 해 보자. Gram-Stain 세균이나 효모를 동정하고 분류하는 염색 방법으로 1884년 덴마크의 의사 한스 크리스찬 그람이 고안했다. 세균은 그 고정 표본을 Crystal violet, gention violet으로 염색하고, lugol solution으로 처리 한 후 순 에틸 알코올로 탈색조작 하였을 때 탈색되지 않는 균군(gram양성균)과 탈색되는 균군(gram음성균)으로 구별된다. 계속하여 옅은 safaradine sol또는 fuchisin sol로 대비염색하면 전자는 그대로 자색, 후자는 후염색에 의해 적색으로 염색된다. 이것은 세포표면 특히, 세포벽의 화학구조의 차이에 의한 것이다. 그람양성균과 그람 음성균 사이에서 화학적.. Biology/미생물학 2022. 8. 2.

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  미생물학실험 | 그람 염색법 TIP 분별염색 기법의 한 종류인 그람염색 방법을 익히고 그람염색 방법의 원리를 알 수 있다. 그람양성균과 그람음성균을 구분할 수 있다. 그람염색법은 미생물을 관찰하기 위해 사용하는 염색법이다. 그람염색은 미생물의 세포벽을 구성하는 특정구조와 화학반응을 일으켜 염색이 이루어지는데, 세포벽에 그람염색과 반응하는 화학구조를 갖는 미생물을 그람양성, 그렇지 못한 것을 그람음성으로 분류한다. 그람염색법을 통해 미생물을 분류할 수 있다. 그람염색(Gram staining)의 원리는 분별염색(differential staining)이다. 분별염색은 세균의 식별을 용이하게 하기 위하여 2가지 이상의 생물학적 염료(biological dye)를 사용하는 염색방법이다. 분별염색 기법은 특정 세포구조물을 염색하기 위해 사.. Biology/미생물학 2022. 8. 1.

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  미생물학실험 | 미생물의 염색 TIP 세균을 분별염색(differential staining) 하게 되면 그람양성균인지 그람음성균인지에 따라 서로 다른 색을 띄게 된다. 나타나는 색의 차이를 통해서 세균을 동정, 분류하고 구조적 차이에 대해서 이해한다. 세포벽은 삼투압이나 외부의 자극으로부터 세포를 지키는 역할을 한다. 종마다 가지고 있는 세포벽의 종류가 다른데 진정세균은 세포벽으로 펩티도글리칸층(N-acetylglucosamin과 N-acetylmuramic acid의 beta-1,4,결합)을 가지고 있다. 그람양성균과 그람음성균 모두 펩티도글리칸층을 가지지만 그 두께에 있어서 차이가 있다. 실험 방법 1. 실험 과정 1) 스포이드를 이용하여 슬라이드 글라스 위에 3차 증류수 1～2 방울 정도를 떨어트린다. 2) 백금이를 화염멸균하.. Biology/미생물학 2022. 7. 30.

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  미생물학실험 | 그람염색법 그람염색은 세균의 형태, 크기, 배열, 그람 염색상에 따라 세균을 분류하는데 가장 흔히 이용하는 염색 방법으로서 병인균의 신속한 예비 보고와 검체 질 평가에도 유용하게 사용된다. 그람염색법은 1884년 덴마크의 의사 H.C.J.그람(1853∼1938)이 고안한 특수 염색법으로, 표본을 아닐린수(水)·겐티아나액(液)으로 물들여서 요오드·요오드화 칼륨액으로 처리한 후, 순(純)에탄올로 씻으면, 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색으로 보인다. 그러나 그 후 여러 가지 균종이 발견되자 그 속에는 조직과 마찬가지로 에탄올 세정에 의하여 탈색되는 균도 있다는 것이 밝혀졌다. 이때 탈색되는 균을 그람음성균, 탈색되지 않는 균을 그람양성균이라 부르기로 하면서 이 염색법은 당초의 목표와는 달리 세균의 분류에 이.. Biology/미생물학 2022. 7. 27.

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  미생물학실험 | 멸균 미생물은 거의 모든 곳에 존재한다. 이러한 미생물을 물리적, 화학적 처리하여 멸살하는 일을 살균이라 하는데 살균은 정도에 따라 모든 생산물의 표면과 내부의 모든 미생물과 바이러스를 제 거하는 일인 멸균, 물질들의 안이나 위에 있는 대부분 혹은 모든 병원균을 제거하는 과정인 소독 으로 구별한다. 미생물학 실험에 앞서 미생물을 제대로 멸균하지 않으면 실험도구를 오염시켜 결 과에 영향을 미칠 수 있다. 따라서 멸균은 기초적이면서도 매우 중요한 과정이라 할 수 있다. 본 실험에서는 물리적 처리 중 가장 일반적인 방법인 열처리에서 건열 멸균법과 습열 멸균법, 화염멸균법의 특징을 이해하고 방법을 숙지해 직접 과정을 진행해 봄으로서 미생물을 열처리하여 사멸시키는 법을 익히고 멸균 전후의 실험도구와 영양배지의 결과물을.. Biology/미생물학 2022. 7. 26.