물리화학실험 | Crystallization of protein - 단백질의 결정화

TIP

 

 

Precipitant(polyethylene glycol=PEG), Salt(Sodium acetate, Potassium acetate, Ammonium acetate), Buffer(Tris buffer), 3차 DW를 각각 다른 비율로 조성하여 solution을 만든 뒤, crystallization을(결정화) 진행하여 본다.

 

 

 

Protein Crystallization

높은 농도의 염이 녹아있는 용액 내에는 물을 차지하기 위한 ion과 protein molecule들의 경쟁이 있다. 경쟁의 치열한 정도는 protein의 표면 극성에 따라 결정지어 진다. 이것은 pH의 주요한 작용 때문이며, 단백질은 solvated 상태를 유지하기 위해 물과 반드시 결합하려고 하지만 ion과의 경쟁으로부터 물을 빼앗긴 단백질들이 결국은 자신들끼리 모여 결합하게 된다. 바로 이 현상 때문에 단백질의 결정을 얻어낼 수 있게 된다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) Precipitant(polyethylene glycol=PEG), Salt(Sodium acetate, Potassium acetate, Ammonium acetate), Buffer(Tris buffer), 3차 DW를 각각 다른 비율로 조성하여 solution을 만든 뒤, crystallization을 진행한다.

 

2) 처음 시행하는 기본 조성비는 아래 표와 같다. (solution은 500λ)

 

Solution의 30%	100% 농도의 4K polyethylene glycol
Solution의 0.2M	1M Sodium Acetate
Solution의 0.1M	1M pH 8.5 Tris buffer
나머지	3차 DW

 

① 표의 구성 성분 중, precipitant의 비중을 Solution의 30% 대신 20, 25, 30%로 바꾼다.

② 표의 구성 성분 중, PEG를 50% 농도의 8K, 15K, 20K, 25K, 30K로 바꾼다.

③ 표의 구성 성분 중, Sodium Acetate의 비중을 Solution의 0.1M, 0.4M로 바꾼다.

④ 표의 구성 성분 중, salt를 2M potassium Acetate로 바꾸고, 이것의 비중을 solution의 0.2M, 0.1M로 바꾼다.

⑤ 표의 구성 성분 중, salt를 10M Ammonium Acetate로 바꾸고, 이것의 비중을 solution의 0.2M, 0.1M로 바꾼다.

⑥ 표의 구성 성분 중, buffer의 pH를 9.5로 바꾼다.

 

3) 조건을 한 번에 한 개씩 바꾸어서 solution을 만들고, 각각의 solution을 이용해서, 단백질 sample을 dropping 하여 결정화 시킨다.

 

 

 

[물리화학실험]Crystallization of protein - 단백질의 결정화 레포트