생명체의 중요한 고분자 물질인 단백질, 탄수화물, 지질의 구조와 기능을 이해하고 발색 반응에 의한 생물학적 분자의 검정법에 대해 알아본다.
탄수화물의 검정
녹말, 셀룰로오스, 포도당등과 간이 일반적으로 탄소․수소․산소의 세 원소로 이루어져 있는 화합물이다. 생물체의 구성성분이거나 에너지원으로 사용되는 등 생물체에 꼭 필요한 화합물이다. 탄수화물은 C, H, O로 구성되어있다. 단당류(monosaccharide)는 3~7개의 C를 함유하고 있으며 더 복잡한 탄수화물을 만드는 기본 단위가 된다. 두 개의 단당류가 결합하여 이당류(disaccharide)를 형성하며 많은 수의 단당류가 결합하여 다당류(polysaccharide)를 형성한다. 포도당과 같은 6탄당은 생명체의 기초적인 에너지원이 되며 식물에 존재하는 녹말과 동물에 존재하는 글리코겐은 저장성 영양물질로 이용되는 다당류이다.
지질의 검정
지질의 검정에는 특정 염료를 이용한다. Sudan lll와 lV를 주로 사용하며 이 염료는 지질을 선택적으로 염색한다. (Sudan lll의 분자의 구조를 보면 이중결합을 하고 있고 전체적으로 길며 붉은색을 띤다.)
단백질의 검정
모든 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기물로 수많은 아미노산(amino acid)이 펩티드결합으로 이어진 연결체이다. 생물체의 몸의 구성성분으로서, 또 세포 내의 각종 화학반응의 촉매물질로서 중요하다. 즉, 모든 아미노산은 비대칭탄소를 중심으로 a-카르복실기와 a-아미노기를 가지고 있다.
실험 방법
1. 탄수화물 검정 : 아이오딘반응, 베네딕트반응
1) E-tube에 0.1% starch 용액을 800㎕씩 넣는다. → ①~ ④ 번의 tube를 준비하고 ①, ② 번 tube에 starch원액 50 ㎕씩, ③, ④번은 glucose 50 ㎕씩 넣는다.
2) Benedict 200㎕, Iodine 50㎕를 넣어준다. → ②, ④ 번은 benedict 용액, ①, ③번은 Iodine용액을 넣어준다. Benedict 용액을 넣어준 tube를 65℃ water bath에 넣고 각 tube의 색깔변화를 관찰한다.
2. 지질의 검정 : 수단 Ⅲ 용액 반응
1) 증류수 1㎖ 을 깨끗한 15㎖ tube에 넣고, Sudan Ⅲ 용액 150μl를 첨가하여 혼합한다.
2) 각 tube에 물 500μl, 올리브기름 500μl를 첨가하고 6분간 상온에서 반응한다.
3) 시험관을 바로 세우고 염색되는 층을 관찰한다.
3. 단백질의 검정 : 뷰렛반응
1) 각 tube에 준비된 0.1% 알부민용액 400㎕을 넣는다.
2) 각 tube에 10% NaOH 400㎕를 넣고 잘 섞은 후 0.05% CuSO4 400㎕를 넣은 후 색 변화를 관찰한다.
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