세포생물학실험 | 세포사의 특징(apoptosis) 관찰

 

 

 

Cell death

cell death는 cell proliferation과 balance를 이루며 형태학적으로 necrosis. autophagy, apoptosis 등으로 나뉜다. 비정상적인 cell death는 암, 자가면역질환, 퇴행성신경질환과 연관이 되어 있다.

 

 

Necrosis

necrosis상태에서 형태학적으로 세포의 부피가 커지고, 세포소기관이 부으며 세포막이 파열되고 세포내용물이 손실되며 적당히 염색질이 응축된다. 세포 밖으로 세포의 내용물들이 방출되므로 염증을 유발한다. 오랜 시간 동안 necrosis는 accidental한 조절되지 않은cell death의 형태로 보았으나, 조절된다는 증거가 축적되고 있다. 예를 들어 death domain receptors (TNFR1, Fas/CD95, TRAIL-R..) 와 Toll-like receptors (TLR3, TLR4)가 necrosis를 유도하는 것으로 나타났다. 이렇게 조절된 necrosis를 accidental necrosis와 분리하여 necroptosis라고 부르기도 한다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) fixed cell on slide 준비(WI-38 cell : Normoxia and Hypoxia, HepG2 : Normoxia and Hypoxia)

 

2) Harris hematoxylin solution 500-1000㎕ 을 slide 위에 분주 후 고르게 펴준다 (tip의 옆면 이용

 

3) 상온에서 6분간 반응시킨다.(slide lack에 놓는다)

 

4) D.W 로 수세한다. → 수세를 깔끔하게 하기위해 넣고 쉐킷쉐킷한다.

 

5) Eosin Y solution 500-1000㎕을 slide에 분주 후 2분간 반응시킨다.(slide lack에 놓는다) → eosin에 담가도 ok이다.

 

6) D.W 로 수세한다.

 

7) mounting solution(50% glycerol in D.W)을 30㎕를 40㎜ cover slip 위에 놓고, 비스듬하게 덮어준다.(기포가 생기지 않도록 조심스럽게) → mounting solution을 바르는 위치

 

8) 매니큐어를 이용해서 cover slip 가장 자리에 발라준다. (지나치게 많은 양을 바르면 굳는 시간이 오래 걸림)

 

9) 매니큐어를 충분하게 dry 해준다. (평행 유지하면서 slide lack에 놓는다)

 

10) Microscope로 관찰한다. → 이번에 조리개 처음 알았다는 그것도 쓰기

 

 

 

[세포생물학실험] 세포사의 특징(apoptosis) 관찰 레포트