일반생물학실험 | Bradford assay를 이용한 단백질(우유)의 정량 - The Bradford Method for Protein Quantitation of Milk

 

 

 

TIP

 

 

1. 세포를 이루고 있는 생체 거대분자의 존재를 생화학적인 실험 방법을 통해서 확인하고 이들의 양을 정량 하는 기술을 습득한다.
2. 표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다.
3. 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득한다. 또한 이 방법들을 이용하여 수용액에 녹아있는 단백질의 양을 Bradford 방법으로 정량한다.

 

 

 

세포를 이루는 분자는 단순한 구조와 기능을 가지고 있는 유기분자들이 모여서 거대분자 (macromolecule)를 형성한다. 세포 내 거대분자는 크게 4 종류로 나눌 수 있다: 단백질 (proteins), 탄수화물 (carbohydrates), 지질 (lipids), 핵산 (nucleic acid). 단백질은 원형질과 효소의 구성요소이며, 탄수화물은 에너지원으로 중요한 역할을 한다. 지질은 모든 생체막 (biomembrane)의 주요 성분이며 에너지원이다. 이러한 거대분자에 대한 생화학적인 확인과 구조에 대한 이해는 세포내 분자들의 기능 및 작용 기전을 분자 수준에서 이해하는데 필수적이다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 단백질의 양을 모르는 시료(milk)를 다음의 비율로 증류수를 이용하여 마지막 부피가 10㎖이 되게 희석한다. 0, 1/5000, 1/2500, 1/1000, 1/500, 1/100

 

2) 각각의 희석된 시료로 부터 200ul씩 2개의 label된 시험관에 분주한다.

 

3) 단백질의 양을 알고 있는 standard solution(1㎎/㎖ BSA, bovine serum albumin)을 0, 10, 20, 40, 60, 80, 100㎕씩 각각 2test tube에 분주한다.

 

4) 2)의 시료에 증류수를 첨가하여 마지막 부피가 200㎕이 되게 한다.

 

5) 각각의 standard tube와 시트(희석된 우유)에 5㎖의 protein reagent를 넣고 거품이 생기지 않도록 parafilm으로 시험관을 봉한 뒤 천천히 뒤집으면서 섞어준다. 발색이 되도록 약 5분 정도 기다린다.(단, 30분을 넣지 않는다.)

 

6) 595㎚의 파장에서 먼저 standard solution의 흡광도를 측정하여 기록하고, 시료의 흡광도를 측정, 기록한다.

 

 

 

[일반생물학실험]Bradford assay를 이용한 단백질(우유)의 정량 레포트