화학공학실험 | TLC를 이용한 아미노산 분석

 

 

 

아미노산을 신속하고 간편하게 분리 동정하는 방법과 그 활용범위를 익힌다. 크로마토그래피는 2종류 이상의 화학성분이 혼합되어 있는 생물소재 추출물이나 유기합성 과정에서 얻어진 화합물을 효과적으로 분리하고 정제하는 방법이다. 물질이 분리되는 기본 원리는 정지상(stationary phase)과 이동상(moving phase)사이에서 각 물질이 가지는 독특한 용해도(solubility)와 흡착성(absorption)의 차이에 따라 선별적으로 분배되는 성질을 이용하는 것이다.

 

얇은 층 크로마토그래피(TLC)는 정지상으로서 유리판이나 플라스틱판 위에 얇게 코팅시킨 silica gel 또는 alumina가 사용된다. TLC에서 주로 사용되는 silica gel은 silicic acid의 중합체로서 다공성 입자를 형성하고 있으며 입자의 표면이 hydroxyl기로 노출되어 극성을 띄고 있다. Stationary phase(고정상)는 크로마토그래피에 분리나 정제될 물질이 올려질 고체 지지제이고 주로 사용되는 흡착제(absorbent)로는 제일 많이 쓰이는 것이 실리카겔이고, 그 다음이 알루미나이다. 취급하고자 하는 물질의 성질에 따라 다른 고정상 물질을 사용한다.

 

Mobile phase(이동상)는 고정상에 올려질 물질을 이동시키기 위한 수단이다. 전개제(developer)라고도 부르며, 전개용매라고 한다. 보통 극성용매와 비극성용매를 적절한 비율로 혼합해 사용한다. 즉, 이번 실험을 통해 화학적 구조가 비슷한 아미노산을 분리하고 표준물질과의 비교, 분석하는 정성분석으로 각각의 아미노산(valine, glycine, methionine, leucine, serine) 의 Rf값을 산출하여 각 아미노산을 분리하는 방법을 익힌다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) TLC plate의 1㎝되는 부위에 같은 간격으로 6개의 점을 연필로 표시한다.

 

2) TLC plate에 valine, glycine, methionine, leucine, serine과 미지시료를 미리 표시해 둔 곳에 용액의 지름이 2 ㎕정도 되게 점적한 후 건조시킨다.

 

3) Beaker에 TLC plate를 넣고 1㎝전까지 TLC용매를 넣어준다.

 

4) Beaker를 랩으로 싸서 밀폐시켜주고 TLC용매가 TLC plate의 위에서 1㎝정도에 올라올 때까지 기다린다.

 

5) TLC plate를 꺼내어 TLC용매가 묻어 있는 곳까지 연필로 표시해준 후 건조시킨다.

 

6) TLC plate를 hood로 옮기고 ninhydrin solution을 뿌려준다.

 

7) TLC plate를 건조시킨 후 5가지 아미노산의 발색 위치를 이용하여 미지시료의 두 가지 아미노산을 찾아낸다.

 

8) TLC plate에서 아미노산들의 점적 위치와 TLC용매가 흡수된 위치를 표시한 곳과의 거리를 x로 놓고 각 아미노산이 올라간 곳과의 거리를 y로 하여 valine, glycine, methionine, leucine, serine과 미지시료의 R_f 값을 구한다.

 

9) R_f값을 바탕으로 미지시료(아미노산)를 추정한다.

 

 

 

[화학공학실험]TLC를 이용한 아미노산 분석 레포트