미생물실험 | 환경오염의 원인인 황화합물 제거를 위한 미생물(T.1082) 배양

 

 

 

최근 환경문제가 대두되고 있는 가운데 오염물질을 처리하는 기술개발에 대한 연구 필요성이 중대해 지고 있다. 악취는 특성상 저 농도에서도 불쾌감이 발생되는 특성을 가지고 있어 지역 주민들의 피해가 급증하고 있으며 세균번식으로 인한 대기오염 등의 환경오염 문제도 생겨나고 있다.

 

본 실험은 대기오염의 원인이 되고 있는 황화합물 악취가스를 제거하고자 분리한 황화합물 분해균주의 배양특성 하여 오염물질의 정화를 통해 환경 문제를 해결 하는 것에 목적을 두고 있다. 악취 제거와 오염세균 번식을 방지하기 위하여 사용할 수 있는 방법은 화학적, 물리적, 생물학적 3가지 방법이 있다.

 

환경오염의 원인이 되고 있는 황화합물 분해, 제거를 위해 물리적, 화학적, 생물학적 방법 중 미생물을 이용하여 오염원을 분해하는 생물학적 방법을 사용하기 위해 미생물 배양을 하였다. 미생물 배양 시 고체, 액체배지로 나누어 고체배지를 통해 single colony를 채집하고 액체배지를 이용해 많은양의 미생물을 배양하며 흡광도와 투과율을 통해 농도를 측정하는 실험을 하였다.

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실험 방법

1. 고체 배지
1) 균을 배양하기에 앞서 균이 문제없이 배양되기 위하여 여러 시약과 증류수를 넣어 교반기를 이용해 시약들과 증류수를 골고루 섞어 주게 되면 황화합물 분해균주가 생존하는데 적절한 pH와 환경이 된다.

 

2) 이후, 비커에 담긴 용액을 액체배지와 고체 배지를 만들기 위한 삼각플라스크에 각각 나누어 담아준 뒤 아가를 넣고 실험 과정 중 새로운 균이 침입하지 않도록 실험에 필요한 도구를 호일로 포장하여 고압멸균기에 멸균을 시킨다.

 

3) 멸균이 완료되면 알코올을 뿌려 클린벤치로 가져온 후 알코올램프를 점화 시켜 필요시 화염멸균을 하며 고체 배지 생성에 필요한 삼각플라스크의 포장을 풀어 페트리디쉬에 적정량을 나누어 담아 배지를 굳혀 준다. 

 

4) 배지가 단단하게 굳게 되면 황화수소 분해 균을 추출하여 증류수 9㎖와 균 1㎖을 넣어 희석하여 줍니다. 이후 희석된 10¹ 균을 다른 9㎖ 증류수에 넣어서 10⁴ 희석을 합니다. 이 과정을 총 4번 반복하여 10¹ ～ 10⁴까지 만들어 준다.

 

5) 단단하게 만들어진 고체배지 위에 소량의 균이 희석된 용액을 떨어 트려 도말봉으로 가볍게 평판도말을 해준 뒤 페트리디쉬 뚜껑을 가볍게 화염멸균 하여 고체배지를 닫아준다. 이후 고체배지가 열리지 않도록 파라 필름을 부착하여 균을 클린벤치에서 꺼내 배양 시켜 준다.

 

6) 시간이 지나 충분히 배양한 균을 가벼운 알코올로 표면 멸균을 해준 후 클린벤치에서 백금이를 이용해 한 개의 colony를 채집하여 준다.

 

7) 채집한 colony를 다른 고체 배지에 획선 도말을 하여준다. (획선 도말시 주의 점은 백금이를 페트리디쉬 뚜껑을 충분히 화염 멸균하여 다른 균이 도말이 유입하지 않도록 하여야 하며 고체배지에 과한 힘을 주지 않고 일정하게 획선 도말을 하는 것이 중요하다.) 획선 도말을 하게 되면 채집한 colony에서 single colony를 얻을 수 있게 된다.

 

 

8) 배양된 고체배지 10¹ ～ 10⁴의 페트리디쉬

 

2. 액체 배지를 이용한 분광광도계 사용

1) 액체배지를 이용하여 균을 배양하기 위해서는 균이 원활하게 자라날 수 있도록 알맞은 시약과 PH를 맞춰준 후 균을 추출하여 액체 배지 내에 주입하여 주면 된다. 이후 액체 배지 내에 새로운 균이 들어가지 않도록 간접화염 멸균 시켜준 마개를 이용하여 단단히 밀봉시켜주면 된다.

 

2) 균이 성장하는 동안 성장 시간과 양을 알기 위하여 분광광도계를 사용한다. 분광광도계를 지시된 사용법과 알맞게 준비시켜준 후 자라나는 액체 배지를 추출해 준 것과 그와 비교할 증류수를 알맞은 위치와 방향으로 넣어 주면 된다.

 

3) 이렇게 증류수와 액체 배지를 넣어주고 분광광도계를 작동시키게 되면 빛의 투과율과 흡광도를 통하여 균이 자라나는 농도를 측정할 수 있습니다.

 

4) 이때 기구를 작동시킬 때 주의 할 점으로는 증류수와 배지를 알맞은 칸에 넣어주는 것과 넣어줄 때 빛이 통과하는 부분에 먼지와 이물질이 묻어 오차가 생기지 않도록 주의해야 한다는 점입니다

 

 

 

 

[미생물실험]환경오염의 원인인 황화합물 제거를 위한 미생물(T.1082) 배양 레포트