일반생물학실험 | 혈구 관찰과 혈액형 분석

 

 

 

TIP

 

 

1. 사람 혈액 중 혈구를 구성하는 세포들의 구조적 차이를 현미경을 통해 비교하고 혈액형 판정 방법과 원리를 이해한다.
2. 혈액세포의 형태적 차이를 현미경을 통하여 관찰하고 혈액형의 판정방법과 원리를 이해한다.

 

 

 

혈액의 정의

보통 혈액은 밀폐된 혈관 속을 순환하는 우리 몸 속의 액체 성분으로 세포외액(extracellular fluid)에 속한다. 혈액량은 사람에 있어 연령, 체형, 성별에 따라 개인차가 있으나 일반적으로 체중의 6～8%로 건강한 사람은 체중 ㎏당 약 71㎖이다.

 

또한, 혈액은 동물의 내부 환경을 이루고 있는 체액으로서 항상성을 유지하면서 영양소, 노폐물, 호흡가스 및 호르몬의 운반과 면역물질의 생성, 백혈구의 식균 작용, 응고의 능력 등으로 생물체를 보호하고 pH, 수분량, 체온 등을 조절하는 중요한 생리작용을 하고 있다.

 

이러한 혈액은 원심분리법에 의하여 크게 세포 성분인 혈구(blood cell)와 액체성분인 혈장(plasma)으로 구분할 수 있다. 혈구는 다시 적혈구(erythrocyte), 백혈구(leukocyte), 혈소판(platelet)으로 구분되며 백혈구는 기능에 따라 중성백혈구(neutrophils) 등 다양한 형태로 존재한다.

 

혈액의 구성과 백혈구세포의 분류

 

 

실험 방법

1. 혈구 관찰

1) 여러 개의 깨끗한 슬라이드를 준비한다(슬라이드는 모서리를 만지면서 조작).

 

2) 알코올에 적신 솜으로 손가락 끝을 소독한 다음 알코올이 완전히 증발한 후 란셋으로 가볍게 찔러서 슬라이드 글라스의 한쪽 끝에서 1.5㎝되는 위치에 혈액 을 떨어뜨린다.

 

3) 다른 슬라이드 글라스를 약 45°기울여 핏방울이 퍼지게 도말한다(한 번 도말한 후 위에 걸친 슬라이드 글라스를 다시 이끌어 들이지 말 것).

 

4) 도말된 혈액에 메틸알코올을 가해 약 3분간 방치하여 말린다.

 

5) 김자염색액(헤마토실린)을 한 방울 떨어뜨려 10-20분간 염색한 다음, 물로 씻은 후 커버글라스를 덮어 현미경으로 관찰한다.

 

혈액 도말법

 

2. 적혈구의 계수 (2～3명 정도의 혈액을 채취하여 관찰, 비교)

1) 혈구계수기와 커버글라스를 증류수로 깨끗이 씻은 다음 건조시킨다.

 

2) 혈액 1방울 채취 (e.p tube)

 

3) 식염수 1㎖ 넣어줌 (1000배 희석)

 

4) 커버글라스를 혈구 계수기 위에 위치시킨 후 모세 유리관을 이용하여 배양액의 일부를 취해 커버 글라스의 주변 부위에 접촉시키면 모세관 현상에 의해 배양액이 커버글라스 밑으로 침투해 들어간다.

 

5) 혈구계수기에 주입 후 관찰(2차 정사각형 5개를 골라서 혈구를 센 뒤에 평균값을 구한다. ⟶ (평균값 × 25)로 1차 정사각형 안의 혈구의 숫자를 얻는다.)

 

6) 현미경 하에서 혈구계수기 위에 위치한 세포들의 수를 센다.

 

7) 계산방법: 커버글라스와 혈구계수기 사이의 간격은 0.1㎜이다. 즉, 혈구계수기에 희석된 혈액을 채우면 혈액의 높이는 0.1㎜가 된다. 혈구계수기의 눈금이 있는 부위에서 가로세로가 각각 1㎜ 크기의 큰 정사각형(일차 정사각형)이 9개가 있다. 1.0㎟의 정사각형은 다시 16개의 작은 정사각형(2차 정사각형)으로 나뉘어진다.

 

2. 혈액형 판정(분석)

1) 슬라이드 글라스 한 개에 항혈청 A, 항혈청 B, 항혈청 D를 순서대로 한 방울씩 떨어뜨린다. 각 혈청 별로 슬라이드글라스를 준비하여 혈청이 섞이는 것을 방지한다.

 

2) alcohol을 적신 cotton으로 새끼손가락 끝을 잘 소독한 뒤 lancet으로 찔러, 두 방울 정도의 혈액을 각각 항혈청에 떨어뜨리고 잘 섞는다.

 

3) 혈액을 혈청 아래 부분에 조금씩 떨어뜨린 후 이쑤시개로 잘 섞어 준다. 이때 혈액이 너무 많으면 응집 반응이 불안정하여 정확한 결과를 얻기 힘들어진다. 이쑤시개는 혈청 종류 당 하나씩 사용하여 섞어준다.

 

4) 정확한 응집은 약 1분 내에 일어나며 육안으로 응집 유무를 판독한다. 슬라이드 글라스를 가온하거나 냉각시키면 판정용 혈청이 농축되어 허위 반응이 나타날 수도 있다. 판정용 혈청의 보존상태가 좋지 않거나 혈 구가 고량일 때 가응집 현상이 일어날 수 있다.

 

5) 현미경으로 응집상태를 관찰하여 혈액형을 판정한다.

 

 

 

 

[일반생물학실험] 혈구 관찰과 혈액형 분석 레포트