생화학실험 | Plasmid DNA isolation from bacterial cell - miniprep

 

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 미리 배양한 대장균 (E.coli) 세포 1.9㎖을 2㎖ tube에 넣고 13,000rpm으로 10분간 원심분리 한 후 상등액은 버린다.

 

2) 남은 용액은 Micro pipette으로 제거하고 Cell 덩어리를 얻는다. 이때 배지 성분이 남아있지 않도록 pipette으로 배지를 완전히 제거한다.

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3) Cell이 들어있는 2㎖ tube에 S1 solution 250㎕을 넣고 pipetting한다.

 

4) S2 solution 250㎕을 넣고 조심스럽게 3～4번 inverting을하고 2분간 방치한다.

 

5) S3 solution 350㎕ 조심스럽게 inverting 한다.

 

6) 10분간 원심분리 한 후 plasmid purification tube에 상등액을 붓는다. 이때 pipette을 사용하지 않는다.

 

7) 1분간 원심분리 한 후 column filter로 걸러진 under tube의 solution은 버린다.

 

 

 

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