생명과학실험 | Protein purification

 

 

 

TIP

 

 

가. 미생물을 이용하여 대량 생산하였던 원하는 단백질만을 특이적으로 정제하려고 한다.
나. soluble 상태의 sample protein을 affinity chromatography 방법을 이용해 target protein만 추출한다.

 

 

 

Affinity chromatography

효소의 기질 특이성과 같이 선택적으로 분리를 원하는 물질과 반응하는 특성을 가진 물질을 고정상으로 삼아 분리시키는 크로마토그래피이다. 예를 들어 효소와 기질, 항원과 항체, 호르몬과 수용체, 렉틴과 다당류, 핵산의 염기쌍 등의 사이에 작용하는 특이적 상호작용을 이용하여 상호작용물질의 한쪽을 불용성 담체에 공유 결합시킨 것을 크로마토그래피용 고정상으로 하고 다른 쪽을 복잡한 혼합계 중에서 선택적, 그리고 가역적으로 포착하여 순화시키는 목적으로 사용한다. 단백질을 특이적으로 분리해낼 수 있고 대량으로 분리해 낼 수 있다는 게 장점이지만 너무 비슷한 분자를 구분하기 쉽지 않고 같은 분자라도 이온성이 있어 산성일 때의 형태와 중성일 때의 형태만 따로 분리하기도 힘들다는 단점이 있다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) Agarose Bead를 IDA(Iminodiacetic Acid)를 이용해 Ni로 charging시킨 column에

① Soluble sample protein과 Binding buffer (Imidazole100μl of 3M)

 

② Washing buffer (Imidazole335㎕ of 3M).

 

③ Elution buffer (Imidazole1.25㎖ of 3M).

 

 

2) SDS gel electrophoresis

 

 

 

Protein purification 레포트