미생물실험 | 순수 분리 및 배양

 

 

 

미생물에 대한 연구 시, 미생물의 생태적, 생화학적, 분자생물학적 등 다양한 생물학적 특징을 밝혀야 하며 이를 위해 목표하는 미생물을 순수 분리하고 배양할 필요가 있다. 다른 종류의 생명체가 섞여 있지 않은 단일 종의 미생물의 배양을 순수 배양이라 하며, 적절한 환경에서 다른 미생물의 노출 및 오염 없이 배양해야 한다.

 

미생물의 배양은 미생물의 먹이가 되는 배지(media)를 이용하며, 배지의 상태에 따라 액체 배지와 고체 배지로 나눈다. 본 실험에서는 Luria Bertani media (이하 LB 배지)를 이용하여 실험하였으며, LB배지는 균 배양액의 생장에 필요한 질소, 탄소, 비타민, 및 무기염류 등을 제공한다.

 

실험에서는 배지에 균 배양액을 streak plate method(획선 평판법)와 spread plate method(표면 도말법)로 접종하여 배양하였다. Streak plate method는 single colony를 얻기 위함이며, spread plate method는 평판 위에 희석된 소량의 배양액을 표면에 주입하여 배양한 결과로 생성된 colony의 개수를 통해 접종한 용액 1㎖당 미생물의 개체 수를 파악하는 것이 목적이다.

 

 

미생물 배지

미생물을 증식시키기 위해서는 탄소원, 질소원, 무기이온, 아미노산, 비타민, 증식 필수 영양인자 등의 영양 성분이 필요하며, 특히 세균류는 다양한 영양 요구성을 나타낸다. 예를 들어 무기물로만 구성된 배지에서 자랄 수 있는 종류가 있는 반면, 아미노산, 비타민과 복잡한 유기화합물이 첨가된 배지에서 자라는 미생물 종류도 있다. 이러한 영양 요구성은 세균의 종류에 따라 각기 다르다. 실험실에서 미생물의 배양에 필요한 각종 영양분을 섞어 인위적으로 만든 혼합물을 배지(medium)이라고 하며, 균 종에 따라 필요한 영양 성분이 다르므로 균의 특성에 맞게 적절한 배지를 만들어야 한다. 배지의 종류는 다양하나, 배지에 사용되는 소재, 배지의 형태, 배지의 사용 목적 등에 따라 다양하게 분류할 수 있다.

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실험 방법

1. 도말 평판법(spread plate method)

1) 튜브 6개 중 하나에 균 시료를 200㎕ 만큼 넣고 나머지 5개에는 900㎕의 물을 넣어준다.

 

2) 균 시료가 담긴 튜브에서 100㎕만큼을 물이 담긴 튜브에 넣고 볼텍스로 섞어 희석한다.

 

3) 앞서 만들어진 희석된 시료의 100㎕만큼을 다시 물이 담긴 튜브에 넣고 볼텍스로 섞어 희석한다.

 

4) 3번 과정을 3번 더 반복하여 총 5개의 농도가 다른 균 시료를 만든다.

 

5) 에탄올이 담긴 비커에 삼각 유리봉을 담근다. 이때 유리봉의 구부러진 부분이 충분히 담기도록 한다.

 

6) 5개 중 10^-3, 10^-4, 10^-5 만큼 희석한 균 시료를 3개의 LB플레이트의 중앙에 100㎕만큼 각각 떨어뜨린다.(주입한다)

 

7) 비커로부터 유리봉을 꺼내 불꽃에 통과시킨다. 이때 배지에 닿을 유리봉 부분이 아래로 향하게 하고, 불꽃을 통과한 유리봉을 10 - 15초간 식힌 후 배지 표면에 댄 후 주입된 배양액이 배지 표면에 골고루 퍼지도록 가볍게 밀고 당긴다.

 

8) 도말이 끝난 평판배지의 뚜껑을 덮고 뒤집어서 30℃에서 2일간 배양한다.

 

2. 획선 평판법(Streak-plate method)

1) 불꽃으로 살균한 백금이를 공기 중에서 10 - 15초간 식힌 다음 균 시료 원액을 떠서 LB plate 한쪽 부분에 여러 번 도말한다.

 

2) 평판배지를 시계방향으로 120° 회전시킨다.

 

3) 백금이를 다시 불꽃으로 살균하여 식힌 다음 앞서 도말한 부분의 끝쪽으로부터 서너번 도말한다.

 

4) 3)-4) 과정을 반복한다.

 

5) 도말이 끝난 평판배지는 뒤집어서 30℃에서 2일간 배양한다.

 

 

 

[미생물학개론]미생물의 순수분리

 

 

 

[미생물실험]순수 분리 및 배양 레포트