미생물실험 | 세균의 생장곡선 (Growth Curve)

 

 

 

TIP

 

 

1. 미생물의 성장과 분열과정을 이해한다.
2. 미생물의 성장은 4단계를(Lag phase, Exponential phase, Stationary phase, Death phase.) 거친다.

 

 

 

미생물의 생육곡선(growth curve)

미생물을 배양할 때 배양시간과 생균수의 대수(log) 사이의 관계를 나타내는 곡선으로 S자를 그리며 유도기(적응기)와 대수기(로그대수기), 정지기, 사멸기로 나누어진다.

 

 

1. 유도기(lag phase, induction phase)

① 균을 새로운 배지에 접종하여 배양할 때 배지에 적응하는 시기

② 세포가 새로운 환경에서 증식하는데 필요한 각종 효소단백질을 생합성하는 시기

 

2. 증식기(대수기), 로그대수기(logarithmic phase, exponential phase)

① 세포가 대수적으로 증식하는 시기

② 세대시간, 세포의 크기가 일정한 시기

 

3. 안정기(정지기), 정상기(stationary phase, maximum phase)

① 생균수는 일정하게 유지되고 총균수는 최대가 되는 시기

② 일부 세포가 사멸하고 다른 일부의 세포는 증식하여 사멸수와 증식수가 거의 같고, 영 양물질의 고갈, 대사생산물의 축적, 배지 pH의 변화, 산소공급의 부족 등 부적당한 환 경이 되어 생균수가 증가하지 않는 시기

 

4. 사멸기(death phase, phase of decline)

① 생균수가 감소하는 시기

② 영양분 고갈과 미생물의 대사노폐물로 인해 생육에 최고로 열악한 환경

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 15시간 이상 배양 한 E.coli를 10^-4 배 희석하여 준비한다.

 

2) 멸균된 상태의 배지 10㎖에 준비된 E.coli 배양액을 1㎖ 접종하여 키운다.(37℃ shaming incubator에서 약 200rpm)

 

3) 접종후 4시간 동안 0 time을 포함하여 매 30분마다 시료 100㎕에 LB broth 100㎕를 첨가하여 큐벳에 넣고 흡광도를 측정한다. (희석배율은 OD 값을 보고 정정할 수 있다.) 이후 같은 희석배율로 OD 값을 측정한다.

 

4) 흡광도는 600㎚에서 측정하고, 0 time에서의 OD (Optical Density) 는 0.08-0.1로 시작하는 것이 적당하다.

 

5) 배양시간에 따른 흡광도의 변화를 그래프용지를 사용하여 그려보고, 이로부터 Exponential phase 에서의 Generation time을 간접적으로 구해본다.(Generation time = 흡광도의 변화가 2배가 될 때까지 걸리는 시간)

 

6) A₆₀₀ = 1.0 → 8 × 10⁸ cell/㎖ 이 공식을 가지고, 시간별 대략적인 cell 수를 계산해본다.

 

 

 

[Biology/미생물학] - 미생물실험 | 세균의 생장 곡선

 

 

 

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