일반미생물학실험 | LB(luria-bertani media) plate 만들기

 

 

TIP

 

 

LB 배지는 호기성 세균의 배양에 사용하는 가장 기본적인 배지로, Luria-Bertani media 에서 앞 글자만 따서 LB 배지라고 한다. (곰팡이나 방선균들을 키울때는 주로 밀기울을 이용한 탄소원이 추가되는 배지를 사용) LB는 액체배지로 만들 수 있고, agar를 넣어서 고체배지로 만들 수 있지만, 세균을 대량으로 키우지 않는 본 실험의 경우 고체배지를 만든다.

 

 

 

LB(Luria-Bertani media) plate

1. 배지

① 세포를 키우기 위해 인공적으로 만든 환경

② 세포에 필요한 성분을 분석해 만든 최소배지에 특별히 필요한 물질을 첨가

 

2. 주요성분

① 탄소원 : glucose, sucrose

② 질소원 : 단백질합성에 이용, 아미노산 peptone 등

③ 무기염류 : 균체의 구성성분, 배지 pH 삼투압조절. (주로 배지조성물질에 필요량이 들어있지만 더 필요한 경우 넣어준다.)

④ 생장소 : yeast extract, beef extract

 

 

배지종류

1. 재료, 조성원에 따라

① 천연배지 : 동식물에서 얻은 천연물질사용, 화학조성이 확실하지 않음

② 합성배지 : 화학조성이 알려진 화학물질만 사용

③ 반합성배지 : 합성배지 성분 일부를 peptone, yeast extract등 천연물로 대체

 

2. 물리적 형태에 따라

① 액체배지 : 미생물의 생리화학적 연구나 미생물의 대량배양에 사용

② 고체배지 : 액체배지에 agar, 젤라틴 등 첨가해 굳힌 것으로 미생물 보존 배양 순수분리 등에 사용. 평판, 고층, 사면배지 등 목적에 따라 사용방법이 다르다.

※ agar : 홍조류에서 추출한 복합다당류(탄수화물), 100도에서 녹고 일단 녹으면 40-50도까지 액체상태유지. 그 후 단단 투명한 gel형성한다, colony 관할용이

 

3. 사용목적에 따라

① 보통배지 : 비 선택적으로 될 수 있는 한 많은 미생물 키울때

② 특수배지 : 특수미생물만 선택적으로 키울 목적

- 증균배지 : 보통배지에서 자라지 않는 미생물, 보통세균과 영양요구가 다르거나 잘 자라지 않는 미생물의 생장 증식촉진

- 선택배지 : 필요한 미생물만 잘 증식, 다른 미생물의 생육억제. 병든 조직에서 특정 균만 분리배양

- 판별배지 : 미생물의 생화학적성질이용, 여러 미생물에서 원하는 특정 미생물만 판별확인

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 개인 플라스크에 1차 증류수 100㎖를 넣는다.

2) LB 2g, Agar 1.5g 을 넣고 호일로 덮는다.

3) 호일 위에 Naming을 한다.

4) Autoclave(121℃ for 15～20min)하는 동안 plate 5개의 아래쪽 상단부에 LB plate 및 naming를 적는다. (뚜껑 열리지 않도록 조심-오염방지) 실험실 테이블을 깨끗이 닦아놓는다. (70% EtOH 사용)

5) LB+Agar를 가져가서 반드시 알코올 램프를 켜고 기포가 생기지 않도록 붓는다.

6) 굳는 동안 씽크대에 있는 솔로 깨끗이 씻어 걸어둔다.

 

 

 

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