일반생물학실험 | 계배 발생

 

 

 

TIP

 

 

본 실험에서는 전재슬라이드를 제작하고 이것과 절편슬라이드의 관찰을 통해 닭의 초기 계배 발생 과정을 조사해 봄으로서 양막류(amniotes:파충류, 조류, 포유류를 포함)의 초기 발생에 관한 개괄적인 개념 습득을 도모하고자 한다. 특히, 초기 발생과정에서 나타나는 배엽의 소구획화, 기관 형성의 가정과 시간적 변화의 양상, 배외막의 형성 등을 알아봄으로써 배 발생 과정에 대한 입체적 이해와 개념을 습득할 수 있도록 한다.

 

 

 

본 실험은 닭의 초기 계배 발생을 관찰함으로서 양막류의 초기발생에 관한 개괄적인 개념을 습득하는 것이다. 발생시간이 적힌 (24h, 48h, 72h, 96h)달걀들을 깨서 배아를 조심스럽게 꺼낸 후 해부현미경으로 관찰하고,영구슬라이드도 살펴봄으로서 그 특징들을 관찰하였다.

 

 

닭의 발생

1. 수정(fertilization)

닭의 배(chick embryo) 발생은 체내수정에 의해 발생이 개시되며 수정은 수란관에서 이루어지고 수정방식은 여러 개의 정자가 한 개의 난자속으로 들어가는 다수정방식에 의하지만 최종적으로는 하나의 정자만이 선택되고 나머지는 난자 안에서 소멸된다. 수정된 난자는 닭의 체내에서 난할이 개시되며 산란시에는 수천개의 할구로 이루어진 포배시기에 도달한 시기로 있게 된다.

 

우리가 보통 보게 되는 수정란은 이 시기의 것을 말하며 발생에 필요한 적절한 온도 및 습도에 이르기 전까지는 발생이 더 이상 진전되지 않는다. 일반적으로 조류의 알은 강단황란에 속하며 난황이 없는 동물극의 세포질은 작은 원반의 형태로 난황위에 떠있으며 이것을 일반적으로 배반이라고 한다.

 

2. Gastulation

배반은 세포질과 난핵을 함유하고 있어서 이 부분에서 난할이 일어나고, 난황은 배발생을 위해 영양을 제공한다. 난자는 배란 후 난관에 진입하면 곧 수정이 일어나고 난할을 시작하며, 난관을 통과하는 동안에 낭배형성(gastrulation)을 거친다.

 

 

실험 방법

1. 배반의 분리 및 고정

1) 발생이 진행되면서 난황막은 약해지므로 터지기 쉽다. 배반의 분리 과정에서 난황막이 터지면 발생중인 배를 잃기 쉬우므로 많은 주의가 필요하다. 계란 껍질을 유리 사발의 벽에 가볍게 부딪혀 금이 가도록 한 다음 이것을 생리적 식염수에 잠기도록 한 뒤 생리적 식염수 내에서 계란 껍질을 벌리면서 난황과 흰자질이 빠져나오도록 한다. 계란 껍질을 제거한 뒤에는 손가락 끝으로 난황을 서서히 돌려 배반이 위로 향하도록 한다.

배반의 크기보다 조금 크게 여과지를 오려서 배반 위에 조심스럽게 올려놓고, 여과지 바깥쪽을 가위로 자른다.

 

2) 앞에서 잘라낸 배반의 주변에 남아있는 난황을 조심스럽게 제거한다. 난황을 제거하는 과정에서는 가급적 끝이 날카로운 물체가 배에 직접 닿지 않도록 하는 것이 좋다. 끝을 가늘게 한 파스퇴르 파이펫을 이용하여 물을 분사시켜 난황을 제거하는 것도 하나의 방법이다.

 

3) 난황이 거의 제거되면 물의 흐름을 이용하여 배반이 여과지로부터 떨어지도록 한다. 이 때 배반이 겹쳐지지 않도록 주의해야한다.

 

4) 앞에서 분리한 배반을 현미경용 슬라이드 글라스를 물 속에 담근 상태에서 위로 올리면서 슬라이드 글라스 표면에 배반이 부착되도록 한다.

 

5) 슬라이드 글라스에 부착된 배반을 깨끗한 생리적 식염수에 넣고 다시 남아있는 난황과 난황막을 제거한다. 여과지를 제거하는 과정에서 난황막이 배반에 부착된 상태로 남아있으면 조심스럽게 제거하도록 한다. 제거하는 방법은 분리된 배반(아직 난황막이 부착된 상태)의 끝을 핀셋으로 잡고 용액 내에서 부드럽게 흔들어 난황막이 배반으로부터 자연스럽게 떨어져 나오도록 한다.

 

6) 일단 배반이 분리되면 직경이 5㎝인 페트리 접시를 유리 사발에 넣고 위로 들어올리면서 배반을 생리적 식염수에 담겨진 채로 회수한다.

 

7) 회수한 배반에 겹쳐진 부분이 있으면 생리적 식염수 내에서 조심스럽게 펴고, 이어 생리적 식염수를 제거해서 배반이 배양접시 바닥에 붙도록 한다.

 

8) 바닥에 붙은 배반의 중심부에 Bouin 고정액을 한 방울 떨어뜨리고 점차 주변부에 고정액을 첨가하여 배반이 고정액에 완전히 잠기도록 한다.

 

 

2. 생체 염색 방법

1) Neutral red 용액(0.1% 용액 : Neutral red 0.1g + 탈이온수 100㎖)을 끝이 가는 파스퇴르파이펫 ㄸ는 주사기를 이용해서 배반 바로 위에 한 두 방울 떨어뜨린 후 염색이 될 때까지 기다린다(5분 내외). 단 초기 발생시기에는 (~24시간) 점성이 높은 물질이 난황을 둘러싸고 있으므로 염색액의 침투가 용이하지 않다.

 

 

 

[일반생물학실험] 계배 발생 레포트