일반생물학실험 | 광합성 색소와 분리

 

 

 

TIP

 

 

종이 크로마토그래피를 이용하여 잎에서 색소를 분리하고 각각의 색소의 최대 흡수파장을 측정한다.

 

 

 

R_f(Ratio of flow)에 영향을 주는 요인

R_f=특정 색소가 이동한 거리/전개액이 이동한 거리'이다. 종이크로마토그래피의 원리는 전개액에 더 잘 녹는 성분이 더 많이 이동하게 된다는 사실을 이용한 것이다.

 

여기서 전개액과 색소는 여과지를 통해서 이동하게 되므로 여과지의 성질에 영향을 받게 되고, 온도의 양 또한 얼마나 잘 이동하는지에 영향을 준다. 또한, 시료의 양, 물의 포화정도, 전개용매의 성질도 에 직접적으로 영향을 주는 요인이 될 수 있다.

 

 

GC의 원리

고정상에 흡착성이 있는 고체의 분말 미립자를 사용하는 기체-고체크로마토그래피와 적당한 비활성 고체분말의 표면에 비휘발성 액체를 보유시킨 기체-액체크로마토그래피로 나뉘는데, 공통적인 원리는 증기압 차이(또는 분자량 차이)에 따른 검출이다. 미지의 시료를 투입하고 가열하면, 가열된 시료는 기체가 되고 이것은 이동상 기체와 함께 column을 통과하게 되면서 증기압차에 따라 분리가 된다. 일반적으로 분자량이 작은 것은 증기압이 높으나, 분자량이 크면 증기압이 낮다. 증기압이 높은 물질은 기체 이동상에 의해서 크게 영향을 받기 때문에 더 빨리 column을 빠져나오게 된다.

 

① 이동상 – 기체, 고정상 - 고체 또는 액체

② GC의 예 : 기체-고체 크로마토그래피, 기체-액체 크로마토그래피

 

 

LC의 원리

계속 흐르는 이동상 속에 주입된 시료는 분리가 일어나는 곳인 column으로 운반된다. 이 관에서는 고정상과 이동상의 평형이 성립하고 있고, 거기에 운반되어 들어간 시료속의 성분은 각각 고정상과 이동상 두 상 사이에 분포된다. 고정상과 상호작용이 전혀 없어서 고정상에 머무르지 않는 성분은 이동상에 모두 녹은 채로 column을 그냥 지나간다. 고정상과 어떤 상호작용이 있는 성분은 고정상과 이동상에 일정한 비로 분포된다. 각 성분에 따라 분포평형이 다르고, 분포가 이동상 쪽으로 치우쳐져 있을수록 더 빨리 용출되고, 성분마다 용출시간에 차이가 있으므로 분리가 이루어진다.

 

① 이동상 – 액체, 고정상 - 고체 또는 액체

 

② LC의 예 : Column 크로마토그래피, 종이 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 아세톤 5㎖를 넣은 막자사발에 일정량의 잎을 넣고 간다.

 

2) 갈아서 나온 추출물을 원심분리 한다.(2000rpm, 5분)

 

3) 밑에 남은 찌꺼기는 놔두고 상층액만을 추출한다.

 

4) 여과지를 길쭉한 모양으로 자르고 종이 밑 부분에 연필로 동그랗게 칠한다.

 

5) 추출액을 동그랗게 칠한 부위에 떨어뜨리고 말리고를 반복한다.(적어도 5~6번)

 

6) 여과지를 전개용매가 들어있는 시험관에 넣는다.

 

7) 전개된 후, 말리고 관찰한다.

 

8) 전개된 여과지를 잘라서 각각을 시험관에 넣는다.

 

9) spectrophotometer으로 각각의 색의 여과지의 흡광도를 측정한다.

 

 

 

[일반생물학실험] 광합성 색소와 분리 레포트