일반생물학실험 | 삼투압에 따른 적혈구와 양파표피세포의 변화

 

 

 

TIP

 

 

광학현미경의 사용방법을 익히고 세균, 동물 및 식물 세포를 비교 관찰한다.

 

 

 

모든생물은 원핵세포 또는 진핵세포로 구성되어 있다. 원핵미생물인 세균은 한개의 원핵세포로 되어 있으며, 크기가 작고 핵막과 세포내 소기관이 존재하지 않는 간단한 구조이다. 한천배지 상에서 관찰되는 colony는 1개의 세균세포가 수회의 분열을 통해 생성된 것이다.

 

세균의 세포 형태를 현미경으로 관찰하면 크게 bacillus(막대기 모양), coccus(구형), 또는 spirillum(나선형) 등으로 구분할 수 있다. 동․식물세포는 핵이 핵막에 둘러싸여 세포질과 분리되어 있고, 세포질 내에는 소포체, 골지체, 미토콘드리아, 엽록체, 액포 같은 세포내 소기관들이 잘 발달되어 있다. 동물세포는 식물세포와는 달리 세포막 외부에 세포벽이 없으며, 액포와 엽록체도 볼 수 없다. 세포의 구조처럼 미세한 것의 관찰에는 현미경이 필수적이다. 현미경의 종류는 매우 다양한데 크게 광학현미경과 전자현미경으로 나눌 수 있다.

 

 

실험 방법

1. 그람염색(Gram staining)에 의한 세균세포의 관찰

1) 접종에 사용할 루프를 불꽃으로 멸균시키고, 식힌 다음 이미 준비되어 있는 세균 배양액을 슬라이드글라스에 한 루프 옮겨서 문지른다(주의: 루프를 내려놓기 전에 불로 달구어 멸균을 시킬 것).

 

2) 슬라이드글라스에 루프로 문질러 놓은 것이 마르도록 기다리는 동안에 다른 세균배양액도 동일한 방법으로 슬라이드글라스에 옮긴다.

 

3) 다 마른 슬라이드글라스의 세균을 알콜 램프 불꽃 위로 신속히 통과시키면서 열고정한다.

 

4) 슬라이드글라스를 그릇 위에 올려놓고 세균이 있는 곳에 crystal violet 용액을 몇 방울 떨어뜨린다. 1분을 기다린 다음 물로 슬라이드글라스를 가볍게 수초간 세척한다.

 

5) Iodine mordant를 몇 방울 떨어뜨리고, 1분을 더 기다린 다음 다시 물로 슬라이드글라스를 가볍게 수초간 세척한다.

 

6) 95% 에탄올로 20 - 30 초간 탈색시키고 역시 물로 세척한다.

 

7) 10초간 safranin으로 대응염색(counter stain)한 후 다량의 물로 남아있는 염색물질을 씻어낸다.

 

8) 슬라이드글라스를 여과지로 찍어 말리거나 공기 중에서 말린 다음 현미경으로 관찰한다(1000 배로 관찰할 것). 세균의 모양과 색깔을 비교하여 그 결과를 실험보고서에 기록한다. 이때 보라색의 세균은 그람양성, 분홍색으로 보이는 세균은 그람음성이라고 한다.

 

2. 식물세포 관찰 - 양파세포

1) 신선한 양파를 약간 잘라서 표피부분(5㎜ 정도)을 면도칼로 조심스럽게 떼어낸다.

 

2) 슬라이드글라스 위에 물을 한 방울 떨어뜨리고 떼어낸 표피를 물 위에 고루 펴서 놓는다(주의: 접히지 않도록 할 것).

 

3) 커버글라스를 덮고 여분의 물을 여과지로 닦아낸 후 먼저 저배율(100 배)에서 관찰한 후 고배율로 관찰한다.

 

4) 관찰이 끝난 후, 아세트산카아민으로 염색(5분)하고 보이지 않았던 어떤 다른 구조가 있는지 관찰한다.

 

3. 동물세포 관찰 - 구강상피세포

1) 면봉으로 입 속 뺨 표면을 가볍게 긁는다.

 

2) 이 때 묻어나온 세포를 슬라이드 글라스위에 가볍게 문지른다.

 

3) 2-3분 후에 재료 위에 70% 에탄올을 떨어뜨려 고정시킨다.

 

4) 1-2분 후 슬라이드 글라스를 물로 씻고 1% 메틸렌블루를 떨어뜨린 후 2-3분 염색한다.

 

5) 저배율에서 관찰한 후 고배율에서 관찰한다.

 

 

 

[일반생물학실험]삼투압에 따른 적혈구와 양파표피세포의 변화 레포트