분석화학실험 | 고정화 효소의 활성 측정

 

 

 

 

TIP

 

 

고정화 효소를 이용하여 활성도를 측정한다.

 

 

 

발색반응

정색반응(呈色反應)이라고도 한다. 특정한 시약에 의해 발색하기 때문에 정성분석(定性分析)에 이용되고, 비색분석을 비롯하여 광흡수분석 ·점적(點滴)분석 등에 널리 쓰인다. 또 발색의 정도로부터 정량분석(定量分析)을 할 수도 있다. 반응에는 여러 가지가 있는데, 예를 들면 3가의 철 이온 수용액에 티오시안산염 수용액을 가하였을 때 심적색이 되는 것은 티오시안산철 착이온이 생성되는 착형성 반응이며, 또 중화적정용 지시약의 발색은 pH변화에 의한 것이다. 또 붕사구슬시험이나 인염구슬시험에서 볼 수 있는 발색 등도 발색반응에 포함시키는 경우가 있다.

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실험 방법

Part1

➀ 고정화 효소 0.1g 준비한다.

 

➁ Oil (MW:373.2)0.6g을 Hexane 30㎖ 에 용해시킨후 0.1gd㎖ 고정화 효소를 넣어 water bath(대체 : shaking incuvator) 37℃ 200rpm으로 30분 동안 반응 시킨다.

 

➂ 효소 반응 후 반응액과 2㎖ Copper acetate pyridine solution을 Test tube에서 1:1로 혼합하여 1분간 반응시킨다.

 

➃ UV-spectrophotometer 715nm에서 흡광도를 측정한다.

 

Part 2

➀ 5%(W/V) Copper- acetate 용액 제조한다.

 

➁ Pyridine을 첨가하여 pH 6.1로 적정한다.

 

Part 3

➀ oleic acid를 hexane에 각각 2μmol, 4μmol, 6μmol, 8μmol의 농도로 제조한다.

 

➁ 이 용액을 UV-spectrophotometer 715nm에서 측정하여 검량선을 작성한다.

 

 

 

[분석화학실험]고정화 효소의 활성 측정 레포트