일반생물학실험 | 종이 크로마토그래피를 이용한 광합성 색소의 분리

 

 

 

TIP

 

 

시금치 잎에서 추출한 광합성 색소들을 종이 크로마토그래피 법을 이용하여 분리하고 색소의 빛의 흡수를 알아본다.

 

 

 

광합성색소

1. 광합성 색소 들은 가시광선의 특정 파장의 빛을 반사하게 되는 데 이 것이 그 색소의 특정 색을 나타내게 된다.

 

2. 색소들은 특정 파장의 빛을 흡수하여 에너지를 얻는다.

 

3. 클로로필이 광합성에 직접 참여.

 

4. 카로틴 계통의 광합성 색소는 흡수한 에너지를 클로로필에 전달.

 

5. 카로틴 계통의 광합성 색소는 광산화 반응으로부터 클로로필 보호

 

6. 카로틴 계통의 색소는 비타민A의 전구체.

 

7. 스펙트럼의 가시영역의 파장을 흡수하는 분자를 색소라고한다. 모든 파장의 가시광선을 가진 하얀 빛이 색소에 투시되면 빛의 어떤 파장은 흡수된다. 산란되거나 통과되는 나머지 파장으로 인해 우리 눈에 색소들이 색을 띄게 보이게 되는 것이다. 예를들어 엽록소처럼 색소가 파란색과 빨간색을 흡수한다면 우리가 보는 것은 남겨진 빛인 초록색이다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 신선한 시금치 잎 약 5g을 가위로 잘게 자른 후, 약절구에 아세톤 5㎖를 넣어 시금치가 걸죽한 죽같이 되도록 갈아준 후 1.5㎖ epp.tube에 조별로 나누어 담는다.

 

2) 2×15㎝ 크기 거름 종이의 한 쪽 끝에서 1㎝되는 곳을 잘라 삼각형을 만든 다음 삼각형 끝에서 2㎝되는 부분을 연필로 선을 긋는다.

 

3) 이쑤시개 또는 yellow tip으로 시금치 죽을 찍어서 종이의 연필선 부근에 얇게 긋는다. 시료가 마르면 다시 찍어서 긋는다. 이것을 여러 번 반복한다.

 

4) 석유에테르:아세톤 = 9:1 의 비율로 섞은 solvent를 준비된 시험관에 2㎖를 넣는다.

 

5) 실험을 위해 준비된 거름 종이의 끝을 고무마개에 압정으로 고정하거나 고무마개에 칼집을 내어 종이를 살짝 끼워 마개를 닫았을 때 종이의 삼각형 끝이 용매에 살짝 닿을 정도로 크기를 조정한다. 시험관에 종이를 넣을 때 종이가 시험관 벽에 붙지 않도록 조심한다. 고무마개로 시험관을 꼭 닫는다.

 

6) solvent가 전개되어 종이 끝까지 오기 전에(끝에서 약 1㎝, 시간이 부족하면 총 이동거리를 10㎝정도로 한다.) 종이를 꺼내어 연필로 최종 선을 표시한 후 말린다. 각 band의 중간 지점을 표시하여 R_f를 구하고 색깔을 기록한다.

 

 

 

[일반생물학실험] 종이 크로마토그래피를 이용한 광합성 색소의 분리 레포트