일반생물학실험 | Cell counting

 

 

 

 

TIP

 

 

세포 배양에서 살아있는 세포의 수를 헤아릴 수 있고 두 실험군의 세포 수를 비교 할 수 있다.

 

 

 

Cell counting

trypan blue 염색 유무를 이용하여 단순히 살아있는 세포의 수뿐만 아니라 죽은 세포의 수를 함께 측정할 수 있고 살아있는 세포와 죽은 세포의 비율 즉, 세포의 생존율을 계산할 수 있으며 여기에 cell counting의 중요성이 있다고 할 수 있다. 살아있는 세포와 죽은 세포의 counting을 통해 세포의 생존율을 계산함으로써 실험연구에 사용되는 세포가 잘 유지되고 있는지 확인할 수 있고 이를 통해 세포 생존에 유리하도록 환경을 변화시켜줄 수 있는 것이다.

 

만약 세포의 생존율이 낮음을 알지 못한 채 실험을 했을 경우 산출된 결과가 본래 세포에 의해 나온 결과인지 아니면 죽은 세포에 의해 나타나는 부작용에 의한 결과인지 알 수 없기 때문에 cell counting을 통한 생존율 확인, 세포의 구성요소, 세포활성, 세포분열 등은 실험결과의 신뢰도 측면에서 매우 중요하다고 할 수 있다. 본 실험은 이러한 생존율 계산을 위해 trypan blue 염색을 하여 살아있는 세포와 죽은 세포의 수를 counting하는 것이다.

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실험 방법

실험 1. Hemocytometer

1) 세포를 배양하는 culture plate의 media를 제거한 후 trypsinEDTA를 넣는다.

 

2) 세포 부유액을 centrifuse tube에 옮긴 후 원심분리를 한다.

 

3) 상층액을 버린 후 media 10㎖를 넣고 pipetting한다.

 

4) hemocytometer에 cover glass를 올린다.

 

5) hemocytometer의 위쪽과 아래쪽에 서로 다른 세포 부유액을 10㎕씩 넣어준다.

 

6) 현미경으로 세포 수를 관찰 한다.

 

실험 2. MTT assay

1) adherent cell이 있는 cell culture의 madia를 제거한다.

 

2) DMEM으로 씻어 준다.

 

3) plate에 MTTsolution(5㎎/㎕)을 100㎕, DMEM 900㎕ 넣어준다.

 

4) 37℃에서 1～3시간 동안 incubate한다.

 

5) MTTsolution을 제거하고 DMSO 1000㎕를 넣는다.

 

6) 96 well plate에 200㎕씩 옮긴다.

 

7) 540㎚에서 흡광도를 측정한다.

 

 

 

[일반생물학실험] Cell counting 레포트