일반생물학실험 | 지질 아미노산 및 단백질의 정성실험

 

 

 

TIP

 

 

1. 크로마토그래피 과정을 상세히 관찰한다.
2. 단백질의 변성과 변성요인에 대해 알아본다.
3. 단백질을 태울 때 냄새와 생성되는 물질에 대해 상세히 관찰한다.

 

 

 

단백질은 생명체에 다량 함유되어 있는 구성성분으로 효소, 에너지원으로 작용하는 등 중요한 역할을 한다. 단백질은 20 종류의 아미노산이 펩티드결합(peptide bond)으로 생성된 중합체로서 구조를 이루어 생체 내에서 가능을 유지한다. 종이 크로마토그래피에 의해 아미노산을 분리하고 닌히드린 반응에 의해 확인하며, 단백질의 정성실험을 실시한다.

728x90

 

 

실험 방법

1. 아미노산 정성실험

1) 전개병을 준비하고, Whatman No.1 여과지를 전개병에 맞추어 준비하여 아미노산 점적할 곳을 연필로 표시한다.

 

2) 표시선 위에 아미노산 용액(Pro+Arg, Asp+Val, Pro+Asp)을 1㎝ 간격으로 직경 1㎜ 정도로 모세관으로 점적하고 말린 후 2회 정도 반복 점적하여 농축되도록 한다.

 

3) 전개병에 페놀 용액을 넣고 뚜껑을 닫아 전개병이 포화되도록 한다.

 

4) 전개병 속에 적절한 크기의 여과지를 세워 크로마토그래피를 시작한다. 여과지를 전개병에 장치했을 때 점적한 곳이 페놀 용매 속에 잠기지 않도록 한다.

 

5) 충분히 용매가 전개되면 전개병에서 여과지를 꺼내어 전진선을 표시하고 풍건하고, 60℃ 정도의 건조기에서 건조시킨다. 용매의 냄새가 없어지면 닌히드린 용액을 분무한다.

 

6) 90℃의 건조기에서 5분간 가열시킨다.

 

7) 여과지 위에 발색된 아미노산의 반점이 나타나면 각 아미노산의 Rf값을 구한다.

 

2. 단백질 변성

1) 시험관에 0.1M HCl, 0.1M NaOH, C₂H₅OH, CH₃COOH 8M 요소를 각각 1㎖씩 넣는다.

 

2) 5% 알부민 또는 계란 흰자를 각 시험관에 1㎖씩 넣는다.

 

3) 시간에 따른 변화를 관찰한다.

 

4) 시험관에 알부민 가루를 소량 넣고 서서히 까맣게 탈 때 까지 가열한다. 단백질이 탈 때의 냄새를 확인하고, 숯처럼 까맣게 태워 탄소의 존재를 확인하며, 시험관 상부에 물기가 생기는 것을 확인한다.

 

 

 

[일반생물학실험]지질 아미노산 및 단백질의 정성실험 레포트