일반생물학실험 | 항생제의 항균 활성 및 대장균 형질전환

 

 

 

TIP

 

 

박테리아의 유전형질을 플라스미드를 이용하여 형질전환시키고 형질전환된 박테리아를 선택하는 과정을 이해한다.

 

 

 

형질전환(Transformation)

외부로부터 주어진 DNA를 받아들여 생물체의 유전적인 성질이 변하는 것을 형질전환(Transformation)이라 한다. 형질전환은 다른 생물 종의 세포에서도 가능하며 플라스미드에 의하지 않고도 가능하다. 형질전환이 모든 세포에서 쉽게 일어나는 것은 아니다. 자연계에서 형질 전환은 박테리아가 유전자 정보를 얻는 주된 과정이 아니다. 이것은 실험실에서 몇 가지 종(Bacillus와 Streptococcus종)만이 쉽게 형질 전환 될 수 있다는 사실에서 알 수 있다. 대장균을 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 조건에서 제한된 양의 DNA만을 도입한다.

 

이러한 종을 효과적으로 형질전환하기 위하여 DNA 도입능력을 강화하는 물리적이거나 화학적인 처리를 거쳐야만 한다. 이러한 처리를 받은 세포를 competent cell이라고 한다. 대장균의 형질전환시 형질전환된 세포를 가려내기 위하여 항생제 저항성 유전자를 가지고 있는 플라스미드 (plasmid)를 사용한다. 형질전환 후 항생제가 포함된 배지에 형질전환 세포를 키우면 이때, 항생제 저항성 플라스미드를 가지고 있는 형질전환체 만이 항생제 저항성 유전자를 발현시킴으로서 항생제가 포함된 배지에서 자랄 수 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) Plasmid DNA 2㎕를 competent cell에 넣어준다.

 

2) Ice에 30분간 넣어둔다.

 

3) 42℃에서 90초간 heat-shock한 후, 바로 ice에 5분간 둔다.

 

4) LB 500㎕를 넣어 섞어준 후, 37℃에서 30분간 배양한다.

 

5) LB.A (ampicilin이 첨가된) 배지와 LBS배지에 spreading한다.

 

6) 37℃에서 하루종일 배양한다.

 

 

 

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