발생학실험 | Xenopus laevis 배아의 전후 축 및 등배축 형성 분석

 

 

 

TIP

 

 

Xenopus laevis 배아의 초기 발생 과정을 관찰하고, Xenopus embryo 전후 축 형성에 LiCl과 SU5402가 미치는 영향을 분석한다.

 

 

 

척추동물의 전후축(anterior-posterior body axis)과 등배축(dosal-ventral body axis)은 배아 발생 초기에 결정된다. 아프리카 무미 양서류의 일종인 Xenopus laevis 배아에서는 난자형성 과정 동안 일어나는 변화와 수정과정의 정자의 유입이 체 축(body axes) 형성에 중요한 역할을 한다. 이 과정은 이후의 신호전달물질들의 작용과 함께 체 축을 결정하게 된다. 본 실험에서는 LiCl와 SU5402가 Xenopus laevis 초기 배아의 체 축 형성에 미치는 영향을 분석한다.

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실험 방법

1. 인공수정

1) 실험 전날 암컷 Xenopus의 림프 주머니에 600~800 unit의 hCG를 주사한다.

 

2) Petri dish에 egg를 짜서 받는다.

 

3) 수컷 Xenopus에서 추출한 testis의 일부를 떼어 forcep으로 정소를 찢어서 희뿌연 액체가 나오도록 하여, 잡고 egg 위를 부드럽게 문질러주며 수정 시킨다. (수정 시간을 기록한다.)

 

4) Testis 조각을 0.5mL의 물이 든 tube에 넣은 후, homogenizer로 으깬다. Testis 현탁액을 pipetman으로 embryo에 여러 번으로 나누어 뿌려준다. (정자가 난자를 잘 만날 수 있게 dish 흔들어 주기)

 

5) 상온에서 5분간 둔 후, petri dish에 0.1X MMR을 채워 상온에 둔다. (수정이 되면 불규칙한 방향을 바라보던 알들이 방향성을 띈다.)

 

2. Embryo의 dejelly

1) 수정 시작 후 15분이 지나면 MMR을 버리고, 3% Cysteine/0.1X MMR을 부어 천천 히 흔들며 수정란이 petri dish 바닥에서 떨어지면, 새 비커로 알들을 옮겨 담아 천천히 흔들어 dejelly 한다.

 

2) 새 Cysteine으로 한 번 정도 갈아준다. (dejelly 과정은 5분이 넘지 않도록 한다.)

 

3) 0.1X MMR로 3번 정도 wash한다. (dejelly 후 embryo가 공기에 접촉하지 않도록 한다.)

 

3. LiCl 처리(1M stock)

1) 32-cell stage embryo를 아래의 조건과 같이 LiCl를 30분간 처리를 한 후, 0.1X MMR로 옮긴다.

 

2) 32-cell stage(St.6)는 수정 약 2시간 50분 후 이다.

 

4. SU5402(FGF receptor inhibitor) 처리(10mM stock)

Embryo에 SU5402를 아래의 조건과 같이 처리한 후, 0.1X MMR로 wash 하고 0.1X MMR에 보관한다.

 

 

 

[발생학실험] Xenopus laevis 배아의 전후 축 및 등배축 형성 분석 레포트