일반생물학실험 | 동물조직표본 제작 및 조직 관찰

 

 

 

TIP

 

 

1. 해부 2. 고정 3. 포매 4. 박절 5. 염색 6. 관찰

 

 

 

해부

1. 대상표본 부검, 채취

1) 마취용 통에 마취제인 ether를 티슈에 충분히 적셔 넣는다.

 

2) 실험대 위에 흰쥐 보다 큰 4주 정도의 rat을 마취통에 넣고 마취시킨다.

 

3) 털 날림 방지를 위해 충분히 해부부위에 Alcohol을 뿌린 후 해부준비를 한다.

 

4) 해부용 가위를 rat의 하복부 가로를 자른 후 흉부까지 외피와 내피를 잘라낸다. 흉부부위 뼈 중앙 부위를 자르면 Perfustion에도 약간의 영향이 가고 피가 많이 흘러 좌심방위에 대동맥을 찾기 때문에 방해되니까 중앙 부위 흉부를 안 자르고 겉을 잘라 피가 안 나게 하는 것이 좋다.

 

5) 흉부를 열고 간을 젖혀 좌심방 대동맥에 바늘을 찔러 PBS에 헤파린을 섞어 관류를 시켜 조직 응고를 방지 시킨다. 그리고 우심실로 들어가는 대정맥을 잘라 피가 잘 빠지게 한다.

① Perfustion(관류) - 동물의 특정 장기를 생체 내에서 꺼내거나 또는 체내에 잔류시킨 상태로 그 장기에 있는 맥관계에 관류액(영양액)을 순환시켜 세포를 일정 기간 in vitro에서‘살아있는’상태로 유지시키는 실험법. in vitro의 실험계에서 가장 in vivo상태에 접근한 계이고, 세포의 집단으로서 장기의 생리기능을 다른 장기의 영향에서 분리해서 관찰할 수 있는 장점이 있다.

 

통상, 펌프를‘인공심장’으로 사용하며 실리콘튜브 등의‘인공맥관계’로 목적장기의 맥관계를 연결해 관류액을 순환시킨다. 장기의 맥관계 저항의 변화에 따라 관류액의 유속을 조정하는 정압식과, 일정한 유속으로 관류액을 흘리는 정용식으로 나눈다. 관류액에서는 동종 또는 이종동물의 혈액(또는 혈구현탁액)을 사용하는 경우와 링거액(Ringer’s solution) 등 으로 대용하는 경우가 있다. 어느 경우든 관류액이 충분한 산소를 유지할 수 있도록‘인공폐’를 연구해야 한다. 간, 신장, 심장, 근육, 뇌 등에서 많이 실험하고 있다.

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6) 이어 피를 헤파린이 섞이지 않은 PBS를 넣어 피를 빼내고 PBS로 충분히 순환시킨다. 각 장기들의 피가 완전히 빠져 색이 하얀색이 되면 PFA(Perfluorinated acid) 고정액을 넣는다.

 

프라스틱의 원료중의 하나 PFA는 산업현장에서 사용하는 물질자체가 아닌 계통을 의미합니다. 가령 '우레탄수지'처럼 계열을 통칭하는 약어입니다. 화학제품으로 판매되는 것이라면 Dupont- Mitsui Fluorochemicals 회사에서 판매하는 테프론계의 제품입니다. Perfluorinated acids (PFAs)라고 부르는데 340-J 등 다양한 제품이 있는 것으로 압니다.

 

이 PFA를 원료로 유통되는 제품은 매우 다양합니다. 최근 몇 년들어 전 세계적으로 유해성이 문제되어 규제를 하는 것이 Perfluorooctanoic acid (PFOA), Perfluorooctane sulfonate (PFOS)가 있습니다. 즉, 이들 전구체를 Perfluorinated acids (PFAs)라고 부르는 것입니다.

 

7) Purfusion(관류)한 10개의 장기를 선택하여 적출해낸다.

 

 

 

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