일반생물학실험 | 흡광도를 이용한 BSA의 단백질 정량 및 미지 농도의 BSA 용액 농도 추정

 

 

 

TIP

 

 

본 보고서에서는 Beer-Lambert Law를 이용해 서로 다른 농도의 Bovine Serum Albumin(BSA) 용액을 만들어 흡광도계로 흡광도를 측정하고 선형 회귀곡선을 그려 미지 농도의 BSA용액의 농도 추정을 목표로 한다.

 

 

 

생명체에 있어서 모든 종류의 고분자 물질은 생명체에 필수적인 기능을 담당하지만 단백질처럼 광범위한 범위의 기능을 담당하는 물질은 좀처럼 찾아보기 힘들다.

 

생물학에서 단백질은 떼려야 뗄 수 없는 분야이다. 생물학의 중추를 이루는 효소, 면역체계, 항상성, 수용체 등등은 모두 단백질로 구성되어 있다. 이러한 단백질을 정량하는 방법으로 여러 가지 많은 방법들이 사용되고 있는데 그 중의 하나가 바로 Beer–Lambert Law를 이용한 방법이다.

 

Beer-Lambert Law는 어떤 용액의 가시광선과 자외선 영역에서 빛의 흡광도가 그 용액의 농도에 따라 결정되는 법칙이다. 물론 이 법칙은 특정 농도 범위에서만 성립되고 화학반응을 고려하지 못한다는 한계점이 존재하지만 그 이외의 영역에서는 큰 위력을 발휘하는 법칙으로 생화학 및 여러 다른 정량실험과 연관된 분야에서 많이 사용된다. Beer-Lambert Law는 유도과정을 생략하고 그 결과만 적자면, 빛이 투과하는 용액의 농도 c와 흡광도 A사이에 다음의 관계식이 성립하는 것을 말한다.

 

A = εlc=소광계수

l= 빛이 통과하는 셀의 길이

 

본 보고서에서는 이 법칙을 사용하여 소의 혈액에 가장 흔한 단백질인 Bovine Serum Albumin의 정량 실험을 진행한다. 이 단백질은 반응성이 낮은 단백질로 앞서 Beer-Lambert Law를 이용한 정량실험에 적합한 단백질이다. 또한 실험의 최종적인 목표는 농도를 알고 있는 시료를 이용해 Node-based Smoothed Point 1st method를 이용해 회귀곡선을 그리고 미지시료의 흡광도를 측정 후 그 미지시료의 농도를 추정하는 것이다.

728x90

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 우선 5x 지시약을 1x지시약으로 희석을 시켜 주어야한다. 이를 위해 파이펫으로 5x 지시약을 2㎖ 튜브에 넣어주고 증류수를 8㎖ 추가하여 1/5배로 희석을 한다.

 

2) 다음으로 2㎍/㎖의 BSA용액(Bovine Serum Albumin)을 각각 총 부피 20㎖의 1/20배, 2/20배, 4/40배, 8/20배, 그리고 16/20배로 희석해 서로 다른 5개의 용액을 마이크로튜브에 준비한다. 희석하는 방법은 위의 지시약을 희석하는 방법과 동일하다.

 

3) 각 튜브에 준비한 1x 지시약을 980㎖ 투입하여 5분간 잘 섞으며 흔들어준다. 이 때 내용물이 가라앉지 않도록 잘 섞어주는 것이 가장 중요하다.

 

4) 다음은 흡광도계의 전원을 연결하고 BSA를 넣지 않은 1x 지시약이 들어 있는 튜브를 이용해 흡광도계의 영점을 맞추고 준비한 BSA 용액 마이크로튜브를 흡광도계에 넣고 흡광도를 측정한다.

 

5) 이제 2㎕의 농도를 모르는 BSA 미지시료와 18㎕의 증류수를 섞어 마이크로튜브에 준비하고 마찬가지로 흡광도를 측정한다.

 

6) 농도를 알고있는 BSA의 흡광도 값을 바탕으로 X축는 BSA용액 농도, Y축은 흡광도로 좌표축을 그리고 1st 회귀곡선을 그린다.

 

7) 이후 미지시료의 흡광도를 이 그래프 위에 투사하면 미지시료의 농도를 추정할 수 있다.

 

 

 

[일반생물학실험]흡광도를 이용한 BSA의 단백질 정량 및 미지 농도의 BSA 용액 농도 추정 레포트