일반생물학실험 | Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석 - The quantitative analysis of proteins by Bradford method

 

 

 

TIP

 

 

표준 단백질용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다.

 

 

 

단백질 분석

기존 켈달 정량분석 방법에서는 시료 중에 함유되어 있는 총 질소함량을 측정하여 단백질 함량을 계산할 수 있도록 되어 있어서 개략적인 분석만 가능케 되어 있는 단점이 있다. 이러한 단점을 보완하기 위하여 많은 학자들은 순 단백질의 총량을 정량할 수 있도록 하는 새로운 방법들을 개발하고 있다. 이들 중 현재까지 많이 이용되고 있는 몇 가지 방법에는 뷰렛방법, Lowry 방법, 탁도 측정법, 펩티드 측정법, 크로마토그래피, 비색법 및 분광광도법 등을 들 수 있다.

 

크로마토그래피는 두 개의 서로 다른 상을 이용하여 화합물을 분리한다. 즉, 정지상과 이동상이 그것이다. 그리고 여러 가지 크로마토그래피들 간의 차이란 상에 사용되는 물질들의 차이를 말한다. 크로마토그래피를 이용하여 단백질, 아미노산, 당류, 지방산, 광물질 및 기타 영량소를 정량하고 독성 물질을 검출할 수도 있다. 비색법이나 분광광도법이란 시료 용액에 광선을 통과시켜서 시료내에 함유되어 있는 영양성분의 농도를 측정하는 화학적 분석 방법이다. 특히, 원자흡수 분광광도계는 광물질 분석에 가장 널리 사용되는 기구이며, 이 기구를 이용하면 광물질의 10억분의 1(㎍/kg) 농도까지 분석할 수 있게 된다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) Sample 측정

 

2) Sample을 1㎖ 취하여 glass 시험관 혹은 플라스틱제의 sample tube에 넣는다.

 

3) 증류수를 1㎖ 가한다.

 

4) Bradford 시약을 0.5㎖ 가한다.

 

5) Vortex mixer로 잘 교반하고 10분 동안 상온에 방치 후 UV/vis spectrophotometer로 595 ㎚에서 측정한다.

 

6) 검량선 작성

① 표준 단백질 용액을 물로 희석하여 표와 같이 각 농도의 용액을 2㎖ 정도 만든다.

② 발색시약 0.5㎖를 첨가한다

③ 595 ㎚의 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.

 

 

 

[일반생물학실험]Bradford 법을 이용한 단백질 정량분석 레포트