일반생물학실험 | 단백질의 정량 및 정성 분석

 

 

 

TIP

 

 

정성분석(뷰렛방법)을 통해 단백질의 포함 유무를 분석하고 정량분석(BCA법)을 통해 단백질의 양을 측정한다.

 

 

 

단백질

모든 단백질은 널리 존재하는 20가지 종류의 아미노산이 특징적인 선상의 서열로 공유결합된 것이다. 이러한 각 아미노산은 각각의 특유의 화학적인 성질을 나타내는 곁사슬을 가지고 있으며 이 20가지 종류의 전구체 분자로 된 집단은 단백질 구조의 언어로 쓰이는 알파벳과 같다고 볼 수 있다. 단백질은 몇 개의 아미노산 잔기로 이루어진 비교적 간단한 펩타이드에서 분자량이 수백만이나 되는 거대한 중합체(polymer)까지 존재한다.

 

 

 

아미노산은 R기의 극성과 전하(pH7에서)에 따라 5가지 종류로 분류할 수 있다.

비극성, 지방족 R기	알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 글라이신, 메싸이오닌, 프롤린
방향족 R기	페닐알라닌, 타이로신, 트립토판
극성, 비전하 R기	세린, 트레오닌, 시스테인, 아스파라진, 글루타민
양전하(염기성) R기	라이신, 아르지닌, 히스티딘
음전하(산성) R기	아스파트산, 글루탐산

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실험 방법

1. 단백질의 정성(뷰렛반응)

1) tube에 이름을 쓴 후 gelatin, Glycine, Skim milk, BSA를 각각 1㎖씩 넣어준다.

 

2) 각각의 test tube에 10% NaOH 1㎖를 넣어준다.

 

3) 이어서 각각의 test tube에 1% CuSO₄ 2방울을 차례로 떨어뜨린 후, 결과를 관찰한다.

 

2. 단백질의 정량(BCA법)

1) Standard 만들기

① BSA(10㎍/㎕) 0, 2, 4, 6, 8㎕ 를 e-tube에 넣는다.

② 증류수를 가해 전체 부피가 25㎕ 이 되게 한다. (용량이 많은 D.W부터 넣는다.)

 

2) Sample 만들기

① Sample 희석 : 혈청원액, 우유, 두유를 각각 10㎕ 취하여 e-tube에 넣는다.

② 중류수를 가해 혈청원액은 50배, 우유와 두유는 각각 10배 희석한다.

③ 희석한 각 용액을 10㎕ 씩 취하여 새 e-tube로 옮긴 후, D.W를 섞어 전체 부피가 25㎕ 이 되게 한다.

 

3. BCA Working solution 만들기

1) 사용하기 직전에 Bicinchoninic acid(BCA) solution과 Copper(∥) sulfate solution를 50:1로 섞는다.

 

2) 반응시키기 빛 흡광도측정

① 위에서 준비한 protein sample 25㎕ (BSA 및 혈청・우유・두유 희석액)에 BCA Working solution 200㎕를 넣은 후 (1:8), e-tube를 tapping 하여 섞는다.

② 96 wells에 ①용액을 225㎕씩 넣는다.

③ 562㎚에서 흡광도를 측정한다.

 

 

 

[일반생물학실험]단백질의 정량 및 정성 분석 레포트