생화학실험 | Tyrosinase 활성 저해

 

 

 

TIP

 

 

인간의 피부색은 멜라닌의 양에 의해서 결정된다. 멜라닌의 양이 많을수록 검은색 피부를 띤다. 이러한 이유로 미백효과를 내고 싶다면 멜라닌의 합성을 저해해야 한다. 멜라닌의 합성을 저해하는 방법 중 하나는 Tyrosine을 산화하여 멜라닌을 생성하는 효소인 Tyrosinase를 저해하는 것이다. 실험을 통해 분광광도계를 이용한 Tyrosinase 활성 저해를 측정한다.

 

 

 

Tyrosinase는 Tyrosine을 산소가 존재하는 곳에서 산화하여 멜라닌을 생성하는 효소이다. 그러므로 Tyrosinase의 활성을 저해시키면 멜라닌 생성이 억제된다. Tyrosinase를 통해 Tyrosine이 산화되면서 주황색을 띠지만, Tyrosinase 활성이 저해되면 Tyrosinase을 통한 Tyrosine의 산화반응이 줄어들기 때문에 Tyrosinase 활성이 저해되는 정도에 따라 점점 연해지면서 투명색을 띤다. 이때 감소하는 흡광도 값을 UV/Vis 분광광도계를 이용하여 490nm에서 측정하여 Tyrosinase inhibition assay (Tyrosinase 저해 활성)을 평가한다.

 

728x90

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 기질(L-tyrosine)을 2mM로 제조한다.

 

2) 96 well plate에 시료 20㎕ 넣고 기질 70㎕와 buffer 60㎕를 넣는다.

 

3) 490nm에서 흡광도를 측정한다.(Blank 값)

 

4) 96 well plate에 효소 5㎕와 buffer 45㎕를 넣는다.

 

5) 37℃에서 10분간 반응시킨다.

 

6) 490nm에서 control의 흡광도 값이 0.3～0.4가 될 때까지 5분간 반응시킨다.

 

 

 

[생화학실험]Tyrosinase 활성 저해 레포트