생화학실험 | Elastase 저해 활성 평가

 

 

 

TIP

 

 

펩타이드는 단백질 성분으로, 길고 짧은 아미노산으로 구성되어 있다. 단백질층을 쌓아주는 역할을 한다. 대부분의 펩타이드는 수분 결합(수분을 끌어들이는) 기능을 한다. 그리고 이론적으로는 피부 손상을 복구하라고 명령하는 세포 대화 성분이다. 이러한 이유로 주름개선효과를 내고 싶다면 펩타이드의 분열을 저해해야 한다. 펩타이드의 분열을 저해하는 방법 중 하나는 펩타이드 결합의 분열하는 과정에서 촉매역할을 하는 효소인 Elastase를 저해하는 것이다. 실험을 통해 분광광도계를 이용한 Elastase 활성 저해를 측정한다.

 

 

 

엘라스틴(Elastin)

엘라스틴은 콜라겐과 함께 결합조직에 존재하고 고무탄력성과 같은 신축성이 있는 단백질이며 조직의 유연성, 신축성에 관여하고 있다. 따라서 신축이 항상 반복되는 조직에는 함량이 많고, 특히 소의 항혁대에서는 건조중량 80% 이상으로 매우 많으며 탄력성이 필요없는 건에서는 0.3%로 적다. 피부의 신축을 설명하는 모델을 아래 그림에 나타내었으나, 콜라겐선유의 교차점에 존재하는 엘라스틴이 원상태로 될 때까지 되돌아가는 것도 있다.

 

이러한 엘라스틴은 피부의 탄력, 주름방지에 중요한 역할을 하고 있다. 피부의 엘라스틴은 가령과 함께 엘라스틴 함량이 감소하면 동시에 슈도엘라스틴(pseudoelastin)이라고 하는 엘라스틴과 콜라겐에서 생성된다고 생각되는 무정형물질이 축적되어 피부의 탄력이 없어지고, 주름의 발생으로 된다. 이러한 경향은 광선 등에 의해 가속된다고 한다. 이런 관점에서도 화장품에의 응용이 시도되었다. 또 엘라스틴은 면역활성이 적은 단백질이며, 화장품으로의 응용에도 알레르기성 반응 등을 일으킬 염려가 거의 없는 재료이다.

 

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 기질을 6.25mM로 제조한다.

 

2) 96 well plate에 시료 20㎕ 넣고 기질 10㎕와 buffer 120㎕를 넣는다.

 

3) 405㎚에서 흡광도를 측정한다.(Blank 값)

 

4) 96 well plate에 효소 13㎕와 buffer 37㎕를 넣는다.

 

5) 37℃에서 10분간 반응시킨다.

 

6) 405㎚에서 control의 흡광도 값이 0.6㎚0.7가 될 때까지 반응시킨다.

 

 

 

[생화학실험]Elastase 저해 활성 평가 레포트