일반생물학실험 | Transformation - bacterial genetics

 

 

 

TIP

 

 

E.coli의 일종인 DH5α를 transformation하고, LA배지와 LK배지에 배양하여 콜로니가 형성되는지 관찰한다.

 

 

 

Transformation

원래 Transformation은 형질전환이란 말이다. 형질전환은 외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전적인 성질이 변하는 일을 말한다. 다당류로 이루어진 두꺼운 막, 즉 협막을 가진 S형균으로부터 DNA를 추출하여 이것을 다당류성 협막을 가지지 않은 R형균에 작용시키면 R형균의 일부가 S형균으로 변한다. 이것은 S형 세균의 DAN 가 R형 세균 속에 들어가서 유전자 발현을 하기 때문이다. 전환을 일으키는데 필요한 DNA의 최소량은 약 10만분의 1 mol이며, DNA의 single strand를 주는 것보다도 double strand를 주는 쪽이 전환을 일으키기 쉽다.

 

다시말하면, 주변 환경과 세포막을 통해 외부 DNA가 흡수되고 cell과 통합되고 발현되어 cell의 유전적 성질이 변하는 것이다. conjugation이나 transduction 등에 의해 일어나며 eukaryote의 경우 transfection이라고 부른다. 일부 bacteria들은 자연적으로 transformation을 하며 다른 cell들은 인공적인 방법을 사용하여 transformation 가능하게 한다. 이렇게 transformation 가능한 상태의 cell들을 competent cell이라고 한다.

 

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실험 방법

1. 실험 과정

1) -70℃ deep freezer에 보관된 competent cell(DH5α)을 ice위에서 천천히 녹인다.

 

2) recombinant DNA 2㎕와 conpetent cell 5㎕를 잘 섞어준 후, ice 위에서 10분간 incubation시킨다.

 

3) LB(Luria-Bertani) 액체 배지 200㎕를 넣고 recovery한다.

 

4) LA 고체 배지에 mixture 분주하고 spreading한다.

 

5) 37℃ incubator에서 18시간동안 overnight한다.

 

 

 

[일반생물학실험]Transformaion - bacterial genetics 레포트