일반생물학실험 | Cell lysis, Bradford Assay

 

 

 

TIP

 

 

Transfection, harvest가 잘 이루어졌는지 알기 위해 cell lysis를 하여 lysate를 얻고 Bradford assay를 통해 protein을 측정한 후 loading sample을 완성한다.

 

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) lysis buffer를 계산하여 만든다

 

2) Deep freezer에 얼려놓은 sample을 가져온다.

 

3) sample이 어느정도 녹은 후 만들어 놓은 lysis buffer를 140㎕씩 넣는다.

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4) Pipetting을 하여 바닥에 붙은 cell을 떨어뜨리고 전부 E-tube에 담는다.

 

5) E-tube를 약 5초간 vortexing하고 ice에 넣어 10mins 기다린다.

 

6) Centrifuge (12500rpm, 12mins, 4℃)

 

7) Pellet은 버리고 supernant만 E-tube로 옮긴다.

 

8) Bradford assay를 통해 nomalization.

 

9) 계산한 농도를 통해 loading sample을 만든다.

 

 

 

[일반생물학실험]Cell lysis, Bradford Assay 레포트