일반생물학실험 | 효소 활성

 

 

 

TIP

 

 

pH와 온도변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 pH와 온도를 알아본다.

 

 

 

효소

효소는 촉매 작용을 하는 생체 물질이다. 한 개 또는 그 이상의 반응물이 일시적으로 결합하는 단백질이다 (모든 효소가 단백질은 아니다.). 효소는 반응의 에너지장벽-요구되는 활성에너지의 양-을 낮추어줌으로써 반응이 빨리 일어나도록 한다. 효소가 이러한 촉매 반응을 일으키기 위해서는 적어도 하나 이상의 반응물과 결합하여야 한다.

 

대부분의 경우 효소와 기질 사이의 결합은 강력한 공유결합이 아니고 수소결합이나 이온결합 또는 반응물 분자의 소수성 부위에 부착되는 형태 등으로서, 이들 결합은 매우 약하다. 결국 효소와 기질 사이의 만족할 만한 결합은 이러한 약한 결합력을 보충할 만큼의 충분한 부위가 서로 맞추어져 분자가 서로 가깝게 접근되어야 한다. 따라서 기질은 마치 자물쇠에 꼭 들어맞는 열쇠처럼 효소분자의 상보적인 표면에 꼭 맞아야 한다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) pH – 4,7,9 / 온도 - 얼음, RT, 체온 / enzyme kinetics analysis - 5%, 10%, 20% / 최적 pH와 온도를 구한 뒤, 기질의 농도에 따른 효소활성을 관찰한다.

 

2) 준비된 효소액 500㎖를 완충용액(위의 각 실험에 맞는) 500㎖와 섞는다. (최적온도를 잴 때는 완충용액이 아닌 온도를 변화시켜준다.)

 

3) 500㎖의 n% H₂O₂ solution with 0.25% SDS and 1% glycerol를 준비된 시험관에 넣는다. (H₂O₂solution은 기질 농도 측정실험을 제외하고는 20%사용)

 

4) 타이머로 거품이 증가되지 않을 때를 봐서 시간을 재고, 그 때의 거품의 높이를 측정하여 속도를 비교한다.

 

 

 

[일반생물학실험]효소 활성 레포트