기기분석실험 | Dialysis

 

 

 

TIP

 

 

Dialysis 원리를 알고 튜브 안쪽의 농도와 바깥쪽 농도를 비교해 본다. 그리고 양 쪽의 농도가 같아 지는 시간을 알 수 있을 것이다.

 

 

 

시료중의 buffer를 교환하거나 탈염하기 위한 가장 일반적인 방법이 투석과 겔여과이다. 한외농축의 경우는 용액을 가압해서 일반적으로 물 분자나 저분자를 제거하지만, 투석의 경우는 대단히 얇은 막(20～100㎛) 재생 cellulose제 다공성 막을 이용하여 자연 확산에 의해서 외액과 내액 간에서 저분자의 교환을 행한다. 아래 표에 나타낸 것처럼 3개의 회사로부터 여러 종류의 공경(한계 분자량)이나 여러 size를 가진 투석막이 판매되고 있다.

 

통상의 단백질에 대하여서는 Visking Celluolse Tubing(Viskase사)의 것도 좋지만, 저분자량의 단백질에 대해서는 다른 회사의 저분자용의 물건(예, Spectra/Por 1 or 3)을 사용한다. 투석막의 size는 0.5㎖에서부터 수백 ㎖정도 까지 있다. 단시간의 투석에는 가능한 한 좁고 긴(표면적이 큰 것)것을 선택한다. 한편, 수분이나 저염농도의 buffer로 투석하면 단백질의 침전이 일어나기 쉽다.

 

상품명	한계 분자량	비고	Maker
Visking Cellulose Tubing	12,000~14,000		Viskase사
Sepctra/Por 1 Sepctra/Por 2 Sepctra/Por 3 Sepctra/Por 4 Sepctra/Por 5	6,000~8,000 12,000~14,000 3,500 12,000~14,000 12,000~14,000	고투석 효율 표준형 고강도	Sepctrum사
Cell-Sep T1 T2 T3	4,000~6,000 8,000~10,000 12,000~14,000		Membrane Fiteration Products 사

대표적인 단백질의 투석막의 종류

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 1L의 10mM TrisHCl pH 8.0을 만든다.

 

2) 20배 희석 시킨 2M NiCl₂ solution 의 Absorbance를 390㎚에서 측정하라.(50㎕ 2M NiCl₂ solution + 950㎕ buffer)

 

3) 투석 튜브(MWCO 12 kDa)의 밑을 집게로 잘 막고 2M NiCl₂ 용액을 5㎖을 넣은 후 기포 없이 또 다른 집게로 잘 밀폐시킨다.

 

4) 2시간 동안 1L의 10mM Tris-HCl pH 8.0에서 투석시킨다. 목적은 2시간 동안 튜브 안쪽 용액의 농도를 가장 낮게 도달시키는 것이다.

 

5) 매 20분마다 outside 용액의 390㎚에서 absorbance를 측정한다.

 

6) 2시간 후, 튜브를 꺼내어 inside 용액의 390㎚에서 absorbance를 측정하고, 부피를 측정한다.

 

 

 

[기기분석실험]Dialysis 레포트