일반생물학실험 | Colony Dilution 및 Spreading

 

 

 

TIP

 

 

배지를 만들고 그 배지에 colony를 희석하여 colony의 개수를 직접 확인하고 계산하여 본다.

 

 

 

식품, 토양, 생체, 그 밖의 환경에서 미생물상(microflora)을 알아보면 미생물들은 단일종으로 존재하는 것은 거의 드물고 여러 가지 종류의 미생물군이 공존하고 있음을 알게 된다. 몇 가지 종류의 미생물이 서식하며 우점종(dominant) 등을 알아보는 생태학적인 연구를 위해서는 무엇보다 먼저 서식처로부터 단일종의 미생물을 분리하는 일과 배양하는 기술이 중요하다.

 

실험실 내에서 인공적으로 미생물을 증식하는 수단을 배양(culture)이라 하는데 두 종 이상의 세균이 동시에 배양될 때 혼합 배양(mixed culture)이라 하고, 혼재된 균군 중에서 원하는 균만 따로 분리하여 배양하는 것을 순수 배양(pure culture)이라 한다. 단일 종의 미생물을 분리하는 방법에는 도말평판법(streak plate method), 주입평판법 (pure plate method), 분산평판법이 있다.

 

본 실험에서는 streaking과 spreading 방법을 익히고, 집락이 형성된 경우 형태(form), 표면(surface), 주변(edge), 고도(elevation), 육안적 특징(optical characteristics), 및 색소생성(chromogenesis) 냄새(odor)등을 중점적으로 관찰한다.

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실험 방법

1. Colony Dilution

1) round-bottom tube에 LB 3㎖을 넣고 single colony(DH5α)를 섞어준다.

 

2) shaking incubaton에 250rpm에 37℃ 15시간 돌려준다.

 

3) 1.5㎖ tube에 DH5α 200㎕를 넣는다.

 

4) 7개의 1.5㎖ tube에 LB 180㎕를 넣는다.

 

5) 1/10으로 dilution해가면서 넣는다.

 

6) 살짝 vortexing한다.

 

7) LB배지를 거꾸로 놓고 네임펜으로 날짜, 농도 등을 기록한다.

 

8) 각각 맞는 칸에 50㎕씩 분주하고 spreading한다.

 

9) 37℃ incubator에 O/N 배양한다.

 

10) 다음날 colony를 관찰한다.

 

2. Spreading

 

3. Streaking

 

 

 

[일반생물학실험]Colony Dilution 및 Spreading 레포트