식물생리학실험 | spectrophotometer를 이용한 식물체의 엽록소 함량 분석

 

 

 

TIP

 

 

Lemnaceae 5종과 1종의 녹조류를 이용하여 각 생물의 생중량을 측정하고 각 식물이 가진 색소(chlorophyll a, chlorophyll b, carotenoides)를 추출하여 각각의 함량을 알아보고 색소에 대해 이해한다.

 

 

 

VIS spectrophotometer

빛의 세기를 파장별로 측정하는 장치. 일반적으로 단색광을 얻는 장치와 이 단색광의 세기를 정량적으로 측정하는 장치로 이루어져 있다. 물질의 동정, 정량, 구조 연구에 이용한다. 이 분광광도계는 크게 광원, 단색화 장치, 시료부, 검출기로 구성되어 있다.

 

그림 1 pectrophotometer principle.

 

물질은 그 종류에 따라 빛 에너지를 흡수하여 전자전이 및 회전과 같은 여러 가지 분자운동을 일으키면서 고유의 흡수 스펙트럼을 나타내게 되는데 분광광도계는 이때의 스펙트럼을 측정하는 장비이다. 분광광도계는 흡수하는 파장을 통하여 물질의 원자 또는 분자구조를 예측할 수 있고, 흡수하는 빛의 세기를 측정하여 그 물질의 농도를 결정할 수 있다. 이러한 원리를 이용하여 분광광도계로 물질마다 다른 흡수 스펙트럼 및 흡수하는 에너지 값의 차이를 기반으로 유기/무기 화합물의 정량, 정성분석에 주로 사용되고 된다.

 

1) 일반적으로 빛이 물체에 닿으면 그 빛은

 

2) 물체 표면에서 반사

 

3) 물체 표면에서 조금 내부로 들어간 후 반사

 

4) 물체에 흡수

 

5) 물체를 통과하는 빛

 

으로 나뉘는데 물체에 의해 흡수되는 빛의 양은 그 농도에 따라 다르다. 따라서 빛의 흡수현상을 이용하여 시료 용액 중에 빛을 흡수하는 화학 물질의 양을 정량할 수 있다. 빛이 시료를 통과하면 시료에 의해 빛이 흡수되기 때문에 빛의 강도가 약해진다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) Ulva pertusa를 pincette를 이용하여 새끼손톱 반 만한 크기로 3개 자른다.

 

2) Lemna paucicostata, Lemna gibba, Lemna minor, Lemna perpasilla, Spirodella polyhiza를 엽체가 두 개 인 것으로 3개씩 Kimwipes에 놓고 물기를 제거한다.

 

3) 각 엽체의 생중량을 Electronic balane를 이용하여 무게를 잰 후 개구리밥은 Micro Centrifuge에 넣고, Ulva pertusa는 15㎖ Tube에 넣는다.

 

4) Lemna paucicostata, Lemna gibba, Lemna minor, Spirodella polyhiza는 Micropette을 이용하여 Acetone 1㎖을 Micro Centrifuge Tube에 넣는다.

 

5) Ulva pertusa는 2㎖의 Acetone을 Tube에 넣는다.

 

6) Aluminium foil으로 Micro Centrifuge Tube Rack을 감싸 빛이 들어오지 않게 냉암보관한다.

 

7) Spectrophotometer로 측정한다.

 

8) 아래의 식을 이용해 chlorophyll a, chlorophyll b, carotenoides의 함량을 구한다.

 

 

 

 

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