일반화학실험 | 얇은막 크로마토그래피에 의한 엽록체 색소의 분리

 

 

 

TIP

 

 

1. 어떠한 특정 물질이 시료에 들어 있는지 알아내는 문제를 다루는 화학의 분야를 분석화학, 더 자세히 말하는 정성 분석이라고 한다. 크로마토그래피는 혼합물에서 각 성분을 분리하여 정량 및 정성분석을 가능하게 하는 중요한 분석방법이다.
2. 본 실험은 분석 화학의 하나의 예로 얇은 막 크로마토그래피(Thin-layer Chromatography, TLC)를 이용하여 식물의 엽록체 색소를 분리를 통해 크로마토그래피의 원리를 배운다.

 

 

 

광합성은 엽록체가 불리는 식물의 특수한 기관에서 수행된다. 엽록체의 내막인 틸라코이드막은 빛에너지를 흡수하는 데에 필요한 광합성 색소를 가지고 있다. 주요 광합성 색소로는 엽록소a, 엽록소b와 카로틴계 색소 등이 있다. 카로틴계 색소에는 β-카로틴, 크산토필, 루테인, 리코펜 등이 있다. 주요색소인 엽록소a와 엽록소b는 각각 청색계열과 적색계열의 빛을 흡수한다.

 

크로마토그래피는 혼합물의 분리, 분석, 화합물의 정제, 분자량의 측정 등에 사용된다.

 

본 실험에는 TLC를 이용한 크로마토그래피의 방법으로 색소를 분리함으로써 각각의 색소를 관찰하고, 색소의 분리과정을 이해하는데 목적이 있다.

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실험 방법

1. 광합성 색소의 분리

1) 일정량의 시금치 잎(약 5g)을 아세톤 아세톤 400㎕, 메틸알콜 1200㎕넣고 막 자사발로 곱게 간다.

2) 이 추출물을 탁상용 원심분리기를 이용하여 원심분리하여 (2,000rpm에서 5분간) 상등액을 취한 후 침전물을 아세톤 5㎖에 다시 현탁시켜 막자사발로 갈고 원심분리한 후 상등액을 위의 상등액과 합친다. (생략가능)

 

2. 얇은막 크로마토그래피를 이용한 엽록체 색소분리

1) 1.5 X 17㎝로 자른 TLC의 끝을 나무젓가락 사이에 끼우고, 여과지의 밑 부분의 끝에서 1㎝ 되는 곳을 잘라 삼각형을 이루게 한 다음, 이곳에서 2㎝ 띄고 연필로 선을 긋는다.

 

2) 이쑤시개를 이용하여 엽록소 추출액을 연필로 그은 선 중앙에 점적한다. 이때 점적한 부분이 가능한 작은 원이 되도록 한다. 완전히 말린 후 10회 반복하여 점적한다.

 

3) TLC를 전개용매가 들어 있는 시험관 안에 0.5㎝ 정도 잠기게 넣는다. 이때 TLC가 시험관 벽면에 닿지 않도록 주의한다.

 

4) 10분 후 TLC를 꺼내어 전개액이 전개된 부분 중 형성된 각각의 밴드를 연필로 표시한 후 여과지를 완전히 말린다.

 

5) 각각 밴드의 R_f값을 다음의 식으로 구한다.

 

 

 

 

[일반화학실험] 얇은막 크로마토그래피에 의한 엽록체 색소의 분리 레포트