일반화학실험 | HPLC를 이용한 카페인 분석

 

 

 

TIP

 

 

HPLC에 의한 롯데칠성음료 칸타타(아메리카노), 광동제약 비타500 분석 실험

 

 

 

이동상으로 액체를 이용하는 크로마토그래피를 액체크로마토그라피라고 하며, 고압 송액 펌프와 고성능 충진제의 사용에 의해 분리를 고속으로 행하는 LC를 특히, 고속액체크로마토그래피(HPLC; High performance liquid chromatography)라고 한다.

 

이동상에 녹이는 시료가 분리의 대상으로 된다. 본 실험은 이 HPLC를 통해 흔히 접할 수 있는 음료 속에 있는 카페인을 분석하여 음료 안에 있는 카페인을 측정하는 실험이다.

 

카페인이란, 차, 커피 등에 함유되는 alkaloid(질소를 함유하고 염기성을 나타내는 물질)의 일종으로 중추신경을 흥분시키는 약리 작용이 있는 물질로써, 롯데칠성음료에서 나온 칸타타-아메리카노와 광동제약에서 나온 비타500음료에 들어있는 카페인을 측정하였다.

 

표준물질과 이 실제 시료의 크로마토그램을 비교해 실제 시료 안에 존재하는 카페인의 양을 계산할 수 있다.

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실험 방법

1. Calibration curve

1) 증류수 5㎖를 5개의 conical tube에 넣는다

 

2) 1,10,20,30ppm에 들어갈 1000ppm MeOH의 양 만큼 증류수를 뺀다.(1 ppm: 5 ㎕, 10ppm : 50㎕ , 20ppm : 100㎕ , 30ppm : 150㎕)

 

3) 각 conical tube에 카페인 표준물질의 농도가 1, 10, 20, 30ppm이 되도록 spike한다.

 

4) 제조된 표준용약 tube에 5M KOH 500㎕를 첨가한다 (PH12이상)

 

5) Diethyl ether 2㎖를 첨가

 

6) shaking 10 min ×170 rpm

 

7) centrifuging 5 min × 2000rpm

 

8) 유기용매 층 2㎖ 를 새로운 tube로 옮긴다.

 

9) N₂ gas 를 사용하여 용매를 완전히 휘발시켜 건조시킨다.

 

10) MeOH 2㎖로 make-up 한다.

 

11) 시료 20㎕를 HPLC에 주입한다.

 

12) 나온 data값으로 검정곡선을 그린다.

 

 

 

[일반화학실험]HPLC를 이용한 카페인 분석 레포트