일반화학실험 | HPLC에 의한 식품 음료 중의 Caffeine 분석

 

 

 

TIP

 

 

1. 자외선을 흡수하는 식품 성분인 카페인을 HPLC로 분석하는 원리와 응용 방법의 이해를 목적으로 한다.
2. 카페인을 표준 물질을 사용하여 standard curve를 작성하고 미지 시료 (실론티, 아메리카노, 레드불)의 retention time과 피크 면적을 측정하여 정량한다.

 

 

 

이동상으로 액체를 이용하는 크로마토그래피를 액체크로마토그라피라고 하며, 고압 송액 펌프와 고성능 충진제의 사용에 의해 분리를 고속으로 행하는 LC를 특히, 고속액체크로마토그래피(HPLC; High performance liquid chromatography)라고 한다.

 

이동상에 녹이는 시료가 분리의 대상으로 된다. 본 실험은 이 HPLC를 통해 흔히 접할 수 있는 음료 속에 있는 카페인을 분석하여 음료 안에 있는 카페인을 측정하는 실험이다. 카페인이란, 차, 커피 등에 함유되는 alkaloid(질소를 함유하고 염기성을 나타내는 물질)의 일종으로 중추신경을 흥분시키는 약리 작용이 있는 물질로써, 미지시료(음료수 제시)에 들어있는 카페인을 측정하였다. 표준물질과 이 실제 시료의 크로마토그램을 비교해 실제 시료 안에 존재하는 카페인의 양을 계산할 수 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 컴퓨터로 HPLC program을 실행하여 제어목록을 클릭한다. 시료를 추가하여 카페인이라고 쓴 후 파일이름(시료이름, 분석시간)으로 설정한 후 제어방법을 설정한다.

 

2) HPLC 기기에 기준이 되는 표준시료와 실론티, 아메리카노, 레드불을 놓는다.

 

3) 분석목록을 클릭한 후, 시료주입 칸에 Left A4→ Left D4로 설정한 후 분석시작(▷) 버튼을 누르면 시료의 주입이 시작된다.(흐르고 있는 이동상에 주입)

 

4) 주입이 시작되면 피크가 컴퓨터 모니터에 피크가 뜨기 시작하고 주입 후 자동세척이 이루어진다.

 

5) 실론티, 아메리카노, 레드불 모두 분리가 종료되면 표준시료를 더블클릭하여 적분을 불포함시키고 피크이름을 카페인 1 로 농도를 0.5로 지정해준다.

 

6) 그 후 검량정보에서 농도의 단위를 M로 바꿔준 후 검량을 실행하고 0.5가 되었는 지 확인한다.

 

7) 나머지 3가지의 시료를 정량한 후 그 값을 비교한다.

 

 

 

[일반화학실험] HPLC에 의한 식품 음료 중의 Caffeine 분석 레포트