일반생물학실험 | 온도, pH가 효소반응에 미치는 영향

 

 

 

TIP

 

 

효소의 반응에는 온도와 pH가 영항을 미친다. 온도와 pH가 변함에 따라 효소의 반응을 관찰하고 최적 온도와 최적 산성도를 찾아본다.

 

 

 

효소

효소는 각종 화학반응에서 자신은 변화하지 않으나 반응속도를 빠르게 하는 단백질을 말한다. 즉, 단백질로 만들어진 촉매라고 할 수 있다. 단백질로 이루어져 있기 때문에 무기촉매와는 달리 온도나 pH(수소이온농도) 등 환경 요인에 의하여 기능이 크게 영향을 받는다.

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실험 방법

1. 전분의 가수분해

1) pH별 전분의 가수분해

① 15㎖ tube의 몸통과 뚜껑에 “Buffer I+전분”, “Buffer II+전분”, “BufferⅢ+전분”으로 표기한다.

 

② 표기한 3개의 15㎖ tube에 전분을 넣은 buffer I, buffer II, bufferⅢ를 10번 invert mix한 후 각각 2㎖씩 넣는다.

 

③ 여기에 각각의 동일한 pH buffer에 녹인 3% amylase 용액 1㎖를 첨가한다.

 

④ 10초간 vortexing을 한 후 37℃항온수조에서 15분간 반응시킨다. 이때 반응이 잘 진행되도록 5분 간격으로 10초간 vortexing을 한다.

 

2) 온도별 전분의 가수분해

① 15㎖ tube의 몸통과 뚜껑에 4℃, 37℃, 100℃로 표기한다.

 

② 표기한 3개의 15㎖ tube에 전분을 넣은(50㎎/2㎖) buffer I을 10번 invert mix 한 후 2㎖씩 넣는다.

 

③ buffer I에 녹인 3% amylase 용액을 1㎖ 첨가한다.

 

④ 10초간 vortexing을 한 후 아이스가 담긴 비터(4℃) 또는 37℃와 100℃로 세팅된 water bath에서 15분간 반응시킨다. 이때 반응이 잘 진행되도록 5분 간격으로 10초간 vortexing을 한다.

 

2. 환원당의 측정

1) 9개의 15㎖ tube준비한다.

 

2) 6개의 tube의 몸통과 뚜껑에는 반응 pH와 반응온도를 표기하고 나머지 3개에는 0.1% glucose, 무처리 전분, blank로 표기한다

 

3) 각 15㎖ tube에 증류수를 450㎕씩 분주한다.

 

4) 반응이 끝난 6개의 tube에서 50㎕씩 취해 증류수를 분주해 둔 각 tube에 넣는다.

 

5) 남은 3개의 tube에는 대조군으로 0.1% glucose용액, 무처리 전분, 증류수를 각각 50㎕씩 넣는다.

 

6) 9개의 tube에 적정용액D(적정용액 A 25㎖ + 적정용액 B 1㎖)를 1㎖씩 넣고 10초간 vortexing

 

7) 100℃로 맞춘 항온수조에서 15분간 끓인다.

 

8) 실온에서 5분 정도 식힌 후 적정용액 C를 500㎕씩넣고 10초간 vortexing한 뒤 실온에서 15분간 반응시킨다

 

9) 9개의 tube에 증류수 5㎖씩 넣어 희석한 후(invert mix 10번) 각 tube에서 1㎖씩 취해 Y cuvette에 넣는다.

 

10) UV/VIS spectrophotometer로 520㎚를 설정하고 증류수만 넣은 시료를 blank로 설정한 뒤 나머지 8개의 시료를 측정

 

 

 

[일반생물학실험]온도, pH가 효소반응에 미치는 영향 레포트