일반생물학실험 | 효소 활성에 온도, pH가 미치는 영향

 

 

 

TIP

 

 

전분 분해효소인 아밀라아제를 이용하여 효소 촉매활성에 미치는 요인들 중 반응온도와 pH의 효과를 관찰한다.

 

 

 

세포의 물질대사과정에는 복잡한 분자를 간단한 분자로 분해하는 이화작용과 작은 분자들로부터 세포 내 고분자들을 합성하는 동화작용이 있다. 이때 반응에 참여하는 반응물질을 기질이라고 부른다. 기질과 효소의 상보적인 구조적 특성으로 인하여 각 효소들은 기질에 대한 높은 특이성을 획득하게 된다. 효소는 활성부위에서 생성물을 쉽게 만들 수 있도록 효소와 기질의 복합체를 전이상태로 전환시킴으로써 반응의 활성화 에너지를 감소시킨다.

728x90

 

 

실험 방법

1. 전분의 가수분해

1) 4℃, 100℃ 안에 있는 버퍼1+전분을 각 2㎖씩 15㎖ tube에 넣는다.

 

2) 37℃ 안에 있는 버퍼1+전분을 각 2㎖씩 2개의 15㎖ tube에 넣는다.

 

3) 37℃ 항온수조 안에 있는 버퍼1+전분, 버퍼2+전분, 버퍼3+전분을 각 2㎖씩 15㎖ tube에 넣는다.

 

4) 1, 2에 각 온도에 맞는 아밀라아제를 넣는다

 

5) 3에 버퍼와 맞는 아밀라아제를 넣는다.

 

6) 원래 들어있던 항온 수조에 15분간 방치한다.

 

2. 환원당의 측정

1) 15㎖ 튜브에 증류수를 0.45㎖씩 넣어 9개를 준비한다.

 

2) 가수분해 sample 6개를 각 튜브에 50㎖를 넣는다.

 

3) 남은 튜브 3개에 각각 0.1% 포도당 아밀라아제를 넣지 않은 전분, 증류수를 각 50㎖씩 넣는다.

 

4) 적정용액 D를 1㎖씩 넣고 잘 섞는다.

 

5) 100℃로 맞춘 항온수조에 15분간 끓인다.

 

6) 실온에서 5분 식힌 후 적정용액 C를 0.5㎖넣고 잘 섞은 뒤 15분간 반응시킨다.

 

7) 9개의 tube에 증류수 5㎖씩 넣어 희석한 후 각 tube에서 1㎖씩 Y큐벳에 넣는다.

 

8) uv/vis spectrophotometer로 520㎚를 설정하고 증류수만 넣은 사료를 blank로 설정한 뒤 나머지 8개의 사료를 측정한다.(y큐벳의 화살표 방향을 기준으로 광원이 통과되게끔 유의하여 측정한다.)

 

 

 

[일반생물학실험]효소 활성에 온도, pH가 미치는 영향 레포트