분광 광도계의 사용법을 익히고, 기본원리인 Beer의 법칙을 이해하며 검정곡선을 그리는 방법을 이해한다.
검정곡선(검량선)
검정곡선은 분석하고자 하는 물질의 '알고 있는 농도와 기기 반응간의 관계'에 대한 곡선이다. 검정곡선은 표준용액의 몇 개 농도수준에서 분석기기의 반응을 측정하기 위하여 작성한다. 이 때 분석하고자 하는 물질, 화합물질의 표준용액 및 작업장 시료는 같은 방식으로 분석기기에 반응을 한다는 가정을 둔다. 검정곡선의 정확도는 정성 및 정량분석에서 필수적이다.
표준용액과 시료는 동일한 시기와 동일한 조건하에서 동일한 분석기기를 이용하여 동시에 분석해야 한다. 표준용액은 적어도 3개 이상의 농도(양)를 만들어야 하고 시료는 이러한 농도범위에 반드시 포함되어야 한다. 검정곡선 범위를 넘는 시료는 외삽하여 추정하면 안되고 희석함으로써 범위 내에 들게 한다.
실험 방법
1. 실험 과정
1) Metertek SP-850 사용시
① 분광광도계를 일정시간(15분정도) 예열한다.
② 분광광도계의 파장을 512㎚에 맞춘다. (최대 흡수파장)
③ 0.1M CoCl2 표준용액을 30㎖ 취한 후 5개의 시험관을 준비한다.
④ 10㎖ 눈금실린더에 0.1M CoCl2 표준용액을 각각 2.0㎖, 4.0㎖, 6.0㎖, 8.0㎖ 취한 뒤 증류수를 가하여 10㎖ 묽힌다.
⑤ 분광광도계에 증류수를 채운 시료용기를 넣고, 뚜껑을 닫은 후 ‘100%T OA' 버튼을 눌러 100% 투과도가 되도록 조절한다.
⑥ ④에서 준비한 각각의 용액을 시료용기에 넣고 투과도를 측정한다.
⑦ A를 눌러 흡광도를 측정한다.
⑧ 미지시료의 투과도와 흡광도를 측정한다.
⑨ X축은 농도, Y축은 흡광도인 검정곡선을 작성한다.(엑셀 사용)
⑩ 검정곡선을 이용하여 미지시료의 농도를 예측한다.
2) Spectronic 20D+ 사용시
① 분광광도계를 일정시간(15분정도) 예열한다. (0%T버튼을 오른쪽으로 돌리면 커진다.)
② 분광광도계의 파장을 512㎚에 맞춘다. (최대 흡수파장)
③ 0.1M CoCl2 표준용액을 30㎖ 취한 후 5개의 시험관을 준비한다.
④ 10㎖ 눈금실린더에 0.1M CoCl2 표준용액을 각각 2.0㎖, 4.0㎖, 6.0㎖, 8.0㎖ 취한 뒤 증류수를 가하여 10㎖ 묽힌다.
⑤ 뚜껑이 닫힌 상태에서 0%T로 투광도가 0이 되도록 한다.
⑥ 분광광도계에 증류수를 채운 시료용기를 넣고, 100%T로 투광도가 100이 되도록 한다.
⑦ ④에서 준비한 각각의 용액을 시료용기에 넣고 투과도를 측정한다.
⑧ mode를 눌러 흡광도를 측정한다.
⑨ 미지시료의 투과도와 흡광도를 측정한다.
⑩ X축은 농도, Y축은 흡광도인 검정곡선을 작성한다.(엑셀 사용)
⑪ 검정곡선을 이용하여 미지시료의 농도를 예측한다.
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