유전학실험 | subcloning I(digestion)

TIP

 

 

우리가 확인하고자 하는 promoter의 활성을 측정하기 위한 실험과정중 하나로써, 이미 vector에 붙어있는 promoter에서 일부분을 자르기 위해 vector를 restriction enzyme(restriction endonuclease)을 이용하여 잘라낸 후 그 크기들을 확인한다.

 

 

 

1. genomic DNA와 plasmid DNA의 차이

2. subcloning

3. electrophoresis

4. restriction enzyme

5. promoter gene & reporter gene

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) plasmid DNA인 pMB01을 준비한다.

2) Microfuge tube에 DDW 12.5㎕, DNA(pMB01) 5㎕, enzyme(BamHI)을 일정량 넣고 혼합한다.

3) briefly spin using a microfuge(check balance)

4) incubate at 37℃ for 30minutes

5) immerse a 1% agarose gel in a gel tank which contains 1X TAE buffer

6) spin down the reacion tube for 5 seconds

7) loading dye와 혼합한 uncut DNA, cut DNA, DNA size marker를 electrophoresis시킨다.

8) UV아래에서 확인한다.

 

 

 

[유전학실험] subcloning I(digestion) 레포트