세포생물학실험 | 단백질 정량 분석 비교

 

 

 

TIP

 

 

단백질 정량 원리에 대해 이해하고, 대표적인 단백질 정량법인 BCA법을 이용하여 직접 단백질을 정량해본다.

 

 

 

단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생명과학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우, 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다.

 

이러한 이유 때문에 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다. 대표적인 정량법은 ① Absorbance at 280㎚, ② Lowry assay, ③ Bradford assay, ④ BCA assay이다.

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실험 방법

1. BSA(Bovine Serum Albumin-소혈청단백질)를 이용한 protein 정량

1) 96 well plate에 각 well 당 농도별 BSA standard protein을 10㎕씩 넣는다.

 

2) sample을 적당량 희석하여 희석 배수 별로 96 well plate에 10㎕씩 넣는다.

 

3) BCA solution A, B를 A:B=50:1의 비율로 아래 식의 volume에 맞춰 15㎖ tube에 섞는다.

 

4) 만들어진 BCA A&B 혼합 solution을 각 well당 200㎕ 씩 넣는다.

 

5) 30분간 37℃ incubator에서 반응시킨다.

 

6) Microplate reader로 흡광도를 측정한다.

 

2. Standard curve와 시료의 정량값 측정

1) 측정한 흡광도에서 D·W의 흡광도를 뺀 값으로 BSA standard 흡광도를 변경한다.

 

2) 아래 공식을 이용하여 Standard curve(y=ax+b)를 그린다.

 

3) 구해진 standard curve 공식에 시료의 흡광도를 대입하여 단백질 농도를 구한다.

 

 

 

[세포생물학실험]단백질 정량 분석 비교 레포트